Gdf9、Dnt1、Zar1、Mater基因在绵羊卵母细胞、卵丘细胞和胚胎中的表达分析.pdfVIP

Gdf9、Dnmt1 、Zar1 、Mater 基因在绵羊卵母细胞、卵丘细胞和 胚胎中的表达分析 摘 要 卵母细胞成熟与质量直接影响着卵母细胞受精及胚胎发育，且卵丘细胞和卵母细 胞之间存在着相互作用。本研究运用Real-time PCR 技术，以不同时期、不同培养方式 的绵羊卵母细胞、卵丘细胞、胚胎为研究对象，检测Gdf9、Zar1 、Mater 、Dnmt1 mRNA 在各细胞组中的表达水平。探讨卵母细胞和早期胚胎发育过程中基因的表达模式，卵 丘细胞与卵母细胞互相作用的分子机理以及 Gdf9、Zar1 、Mater 、Dnmt1 mRNA 水平 变化与卵母细胞质量的相关性。主要研究结果如下：Gdf9、Zar1 、Mater 、Dnmt1 mRNA 表达水平随着卵母细胞成熟和胚胎分裂逐渐降低(P0.05) ；Gdf9 和Zar1 mRNA 从卵母 细胞至囊胚都有表达，Dnmt1 mRNA 在 16-细胞期表达水平降到最低(P0.05) ，在囊胚 中没有检测到，Mater mRNA 则在 8-细胞期降到最低(P0.05) ；在 GV 期卵母细胞中 Gdf9、Zar1 、Mater mRNA 相对表达水平最高(P0.05) ；Dnmt1 mRNA 却是在 12 h 表 达水平达到最高(P0.05) ；随着卵母细胞的成熟，各基因都在 18-24 h 逐渐降低且差异 显著(P0.05) ；然而在30 h，4 个基因的表达水平又显著上升(P0.05) 。4 种基因的mRNA 在无极体卵母细胞中的表达水平均高于在有极体卵中的表达水平(P0.05) 。检测 Gdf9、 Zar1 、Mater 、Dnmt1 mRNA 在不同培养方式卵母细胞和卵丘细胞中的表达水平，结果 显示：Gdf9、Zar1 、Mater mRNA 在体外培养的裸卵中的表达水平均低于卵丘-卵母细 胞复合体(P0.05) ； Gdf9、Zar1 、Mater mRNA 在未成熟卵母细胞中的表达高于 24 h 成熟卵母细胞(P0.05) ，而在未成熟卵丘细胞中的表达低于成熟培养的卵丘细胞 (P0.05) 。综上所述，Gdf9、Zar1 、Mater 、Dnmt1 mRNA 在早期胚胎中表达呈动态变 化；Gdf9、Zar1 、Mater 、Dnmt1 mRNA 表达水平在 24 h 成熟质量差的卵母细胞中的 表达水平高于24 h 成熟质量好的卵母细胞，可以作为衡量卵母细胞质量的分子指标； Gdf9、Zar1 、Mater mRNA 表达有差异，提示上述这些基因可能参与了卵丘细胞和卵 母细胞之间的互相作用。 关键词：卵母细胞成熟；早期胚胎发育；卵丘细胞；卵母细胞质量；实时定量PCR I Gdf9、Dnmt1 、Zar1 、Mater Expression in Ooctyes、Cumulus Cells and Embryos of Sheep Abstract Oocyte maturation and quality influence fertilization and embryo development directly, and there are some interactions between oocytes and cumulus cells. This thesis studied the mRNA expression of Gdf9、Zar1 、Mater 、Dnmt1, analyzing by using Real-time PCR, in ovine oocytes, cumulus cells and embryos from different sources, stages or culturing systems in order to investigate the expression patterns of those four genes