FoxO1相互用蛋白FBP1在细胞自噬中的作用及机理的研究.pdfVIP

摘要 Forkhead家族蛋白是一类含有一个保守的DNA结合结构域为特征的转录调 控子家族，存在于所有的真核生物中。在Forkhead转录因子家族中，FoxO亚族 到一个新的FoxO结合蛋白，并将其命名为FBPl。在HEK293T细胞内过表达 应实验分析，我们发现FoxO蛋白家族成员分别能免疫沉淀内源性的FBPl蛋白。 4T-1和 用，我们将人的Fox01基因和人的FBPl基因序列分别克隆到pGEX 即aal50．270。 我们进一步设计如下实验来探讨Fox01．FBPl复合体的生物学效应。在 的作用，这些证据提示FBPl有可能与细胞自噬有关。为了验证该假设，我们在 II蛋白的水平，我们发现 FBPl敲低的细胞中检测自噬标记分子p62蛋白和LC3 p62蛋白水平上调而LC3II蛋白水平下调；透射电镜实验显示，在敲低FBPl基 因的HCTll6细胞中，细胞内畸形线粒体的数量显著增加，线粒体发生肿胀甚至 呈空泡状。以上证据提示FBPl基因敲低后细胞自噬存在缺陷。 鉴于Fox01在细胞自噬中的重要作用，我们的结果提示FBPl可能通过与 Fox01蛋白相互作用来影响Fox01的表达水平，进而影响细胞自噬过程。 关键词：Fox01：FBPl：细胞自噬 Abstract FoxO factors tothe Forkheadof transcriptionbelong large familyproteins，a of characteredaconserved domain familytranscriptionalregulators by DNA-binding is inall termedthe‘forkheadbox’．TheForkhead familypresenteukaryotes．Among theForkhead FoxO containsfourmembers：FoxO family,the 1，Fox03， subgroup a novel Fox04and haveidentified Fox06．Byyeasttwo—hybrid．we named FoxO 1， FOXO-interactingprotein FoxO—bindingproteinI(FBP1)．Flag—tagged were inHEK293Tcells．Wefoundthat Fox03aandFox04separatelyoverexpressed FoxO membersinteractedwitll FBP1 family by endogenous in 1 andFBP1 GST-FoxO1 and cortfirmedvitrointer