ELP-Intin系统在抗菌肽基因工程中的应用.pdfVIP

目录 IllIr IIr!lfllIlffllffI 』!lI IfIIflUl．,,,,,mr,rlll llIIII Y1 目录 摘要…………………………………………………………………………………．．I Abstnlct……………………………………………………………………………………………………．．?…．】]【 引言……………………………．．…………………………………………………．．Ⅲ 第一部分文献综述………………………………………-…………………………．．1 第1章抗菌肽的研究意义及研究方向…………………………………………．2 1．1抗菌肽的分类_…………………………………………………………2 1．2抗茵肽具有的生物活性………………………………………………。2 1．3抗菌肽药物的开发现状……………一j………………………………。5 1．4抗菌肽的获得途径………………………-…………………………小．5 第2章ELP—Intein系统介绍．．．……………………………………………………8 2．1Intein介导的新型蛋白质纯化方式……………………………………8 第二部分实验研究…………………………………………………………………13 第3章表达载体构建、融合蛋白表达纯化、目的蛋白获得及其活性鉴定．14 3．1实验材料…………j：…………………………………………………．14 3．2实验设计………………………．．：…………-………………………．．15 3．3实验步骤…………………．．．……j………………………………………15 ． 3．4实验结果………………………………………………………………．20 3．5讨论…………………………………………………………………………………………．27 参考文献………………………………………………………………………………．．29 本研究创新点…………_……………………………………………………………。34 硕士在读期间研究成果…^…………………^………………………………………35 致{射…………………………………………………………………………………．36 摘要 摘要 抗菌肽是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽，存在于多 种生物体中，是宿主免疫防御系统的一个重要组成部分。这些抗菌肽能作用于革 兰氏阴性、革兰氏阳性细菌、真菌、寄生虫、肿瘤细胞甚至是某些具有包膜的病 毒，而绝大多数抗菌肽对哺乳动物正常细胞无害，并且其杀菌机理与传统抗生素 完全不同，被学者认为是一种天然抗生素而备受青睐。 。 近年来，研究者开发了很多种技术通过重组表达的策略来获得抗菌肽。原核 表达是目前最常用也是最经济的方法。本实验利用大肠杆菌表达系统表达两种抗 菌肽，一种是天蚕素家族的家蚕抗菌肽CM4，另一种是防御素家族的人B防御素 (H13D4)，然后用一种完全无需色谱层析的方法纯化获得目的蛋白。我们将CM4 纯化得到融合蛋白，再由Intein进行自我切割去除融合标签获得目的蛋白。最终 获得的重组抗菌肽表现出与化学合成和传统亲和层析方法获得的抗菌肽一样的 活性。这种低成本、方便可行的新型的纯化方式有望为抗菌肽以及其他蛋白的规 模化制备开辟新的途径。 关键词：抗菌肽，类弹性蛋白，内含肽，可逆相变，自我剪切， Abstract Abstract MoricinCM4andHuman allcationi