318例中国汉非综合征型聋病人群三个耳聋基因突变频谱分析.pdfVIP

31 8例中国汉族非综合征型聋病人群三个耳聋基因突变频谱分 析 中文摘要 目的 1．收集温州医学院各大合作医院门诊患者的临床资料，了解非综合征型听力损 loss，NSHL)的发病情况。 失(nonsyndromichearing 2．通过统一的调查方法、标本采集，利用基因诊断方法对门诊非综合征型耳聋 患者及其家系成员进行线粒体12SrRNA基因和核基因叫酗和例B6基因突变检测， 绘制基因突变频谱，分析这3个基因突变在NSHI发病中的作用。 DNA， 分析。 4．通过对携带G昭3和G馏6基因突变的中国耳聋家系进行临床、遗传和分子生 物学特征分析，探讨突变位点与耳聋的关系，为耳聋相关基因的筛查、耳聋诊断及 预防提供依据。 方法 1．收集温州医学院各合作医院耳聋患者血样318例。并进行详细的临床资料分 析，建立临床和分子遗传学资料数据库。 2．采集无亲缘关系正常对照人群血样本。 3．提取所采集血液样本的全基因组DNA。 chain 4．通过聚合酶链反应(polymerise rIⅢA和核基因GJB3、GJB6基因区域进行突变筛查。 5．PCR产物纯化后直接进行测序分析。 6．绘制非综合征型耳聋患者线粒体12S ：韭 p日o 7．对携带GJB3和GJB6基因突变的中国汉族耳聋家系进行系谱分析，收集临床 相关资料并进行听力学检查，分析其他可能的因素对这些家系耳聋外显率的影响。 6 结果 rRNA基因筛查， 1．对已收集的318例门诊非综合征型耳聋患者进行线粒体12S 共检测出线粒体12S rRNA 基因的高度保守区域且未在正常对照中发现，可能增加了耳毒性药物的敏感性。 2．对已收集的318例门诊非综合征型耳聋患者进行核基因G昭3和G馏6突变筛 c31 G250A突变位于GJB3基因高度保守区域且没有在正常对照人群中发现，可能与非 综合征型耳聋相关。其他变异可能为多态性变异。携带GJB3基因变异的13位患者中， delC杂合突变。 只有1例携带C243T变异的患者携带了GJB2基因235 3．318例门诊非综合征型耳聋患者GJB6基因突变筛查共发现2个变异位点，其中 1个为228delG杂合突变，该突变导致终止密码子提前至第81位，翻译的多肽与野生 型蛋白相比截短了181个氨基酸。在19个物种中进g?Cx30氨基酸序列保守性分析证 L210L，保守性为94．7％。对照组中未发现这两种突变。 4．我们分析了线粒体12SrRNA基因和核基因G膻3和G馏6上各个突变位点与耳 聋表型之间的关系；明确了中国NSHI门诊病例线粒体12SrRNA和核基因GJB3和 GJB6的突变发生频率；绘制了中国NSHl人群线粒体12SrRNA基因和核基因G腰3和 GJB6的突变频谱。 5．318例中国汉族NSHl人群中未发现同时携带线粒体12S 基因变异的患者。 结论 1．线粒体12SrRNA基因突变筛查发现，与药物性耳聋相关的A1555G突变有29例， 说明这两种突变是药物性耳聋的主要致病形式。线粒体DNA继发突变、线粒体DNA 多态性及其他核修饰基因可能对这些耳聋家系的表型表达起到修饰作用。这些数据 为氨基糖甙类抗生素耳毒性和非综合征型耳聋的预防和耳聋基因诊断的开展提供可 靠的依据。 2．GJB3基因筛查发现的可能的致病突变均为杂合形式，提示GJB3基因可能以杂合 突变形式影响中国人群听力情况，该基因突变患者的耳聋表型表达还可能与其他因 素如线粒体单倍型、其它核修饰基因或环境等有关。我们的数据为研究中国汉族非 综合征型聋病人群的致聋因素提供了有价值的信息和技术。 3．GJ