Flg22诱导海带防御反应初步研究.pdfVIP

Fl 922诱导的海带防御反应初步研究 }两要 在长期的进化过程中，植物形成了多种防御反应途径来抵御外界病原物的侵 染。其中，来源于病原物中的一些信号分子，如鞭毛蛋白，脂多糖等，可诱导植 物产生非特异性的防御反应。现己证实细菌鞭毛蛋白及其N端一个保守的22个 氨基酸的多肽(fi922)是高等植物有效的外源激发子。低等藻类与高等植物在 防御反应途径上具有保守性。本研究以fi922为激发子，研究其诱导海带雌配子 体和孢子体防御反应的特征，以丰富植物分子病理学理论。—研究结果如下： 1．Fl酡2诱导的海带细胞死亡现象的观察 Fi922诱导雌配子体的终浓度为200gM，诱导孢子体的终浓度为500“M。 运用Evans h，未能观察 blue染色方法发现，雌配子体受fi922诱导后3．6 到细胞死亡现象，诱导后9．12 h，观察到大量死亡的细胞；孢子体受fi922诱导 后2．6h，未能观察到细胞死亡现象，诱导后8．10h，观察到大量死亡的细胞。 2．Fi922诱导的海带雌配子体细胞的亚显微结构变化 电镜观察结果表明，fi922诱导后，雌配子体细胞的形态结构变化与高等植 物发生超敏反应的程序性细胞死亡的变化相似，主要特征为色素体浓缩，细胞壁 增厚以及线粒体和细胞核在细胞死亡的后期仍然保持相对稳定的结构。F1922诱 导后2．4 h，色素体发生浓缩，细胞壁增厚；诱导后6．8h，整个细胞开始收缩 变小，色素体浓缩程度增大，核膜出现稍微溶解的现象。整个诱导过程中，线粒 体始终保持完整的结构。 3．Fi922诱导的海带孢子体细胞DNA降解特征的观察 h，即能观察到DNA 运用TUNEL检测方法证实，孢子体受fi922诱导后2 断裂现象，而且3-OH末端断裂的数量随诱导时间的延长而增多，并有从诱导 部位向外扩散的趋势。 4．F1922诱导的海带细胞H202的定量检测 运用Luminol荧光检测方法，发现fi922诱导后0．2h雌配子体H202释放 量迅速升高，至2h时达到峰值，约为46 gM，随后H202释放量逐渐减少，至5 h，恢复到诱导前的初期水平；孢子体受fi922诱导后H202释放量迅速增加，至 3h时达到峰值，约为20 h，恢复到诱导前的初期水平。 I．tM，至6 5．Fi922诱导的海带细胞ROS的组织学检测 应用荧光染料2’，7’．二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH．DA)进行ROS组织 h即观察到绿色的荧光信号， 学检测，发现雌配子钵和孢子体受m922诱导后1 信号强度随诱导时间的延长而增加，分别在诱导后2h和3h信号最强，随后绿 色荧光信号的强度逐渐减弱。ROS的产生趋势与Luminol荧光检测方法的结果 相一致。 6．Fi922诱导的海带雌配子体细胞抗氧化酶活性的检测 应用分光光度法对抗氧化酶活性进行测定，结果表明雌配子体受fi922诱导 后0．1h内，CAT的活性急剧上升，至lh时达到峰值，为10．4U‘mL～，随后 CAT活性逐渐降低，到5h降低到对照组水平。SOD活性的变化规律与CAT活 U’mL～。与 性的变化规律相似。在2h时，SOD的活性达到最大值为：73．29 h时出现峰值， CAT和SOD活性的变化规律不同，GSH．PX活性上升缓慢，到3 h时，SOD的活性并没有降低到对照组 为252．08U‘mL．1，随后活性下降，到5 水平，而是略高于对照组水平。 7．Fi922诱导的海带雌配子体细胞多酚含量的检测 应用Folin．Denis试剂对多酚含量进行检测，发现雌配子