DlK1-Di3印记区域Meg8基因及IG-DMR在体细胞核移植牛中DNA甲基化状态分析.pdfVIP

摘要 体细胞核移植(体细胞克隆)技术在医疗、农业及畜牧业等诸多领域有重要的 应用价值，而克隆效率低和克隆动物发育异常严重阻碍了该技术的应用。供体核表 观遗传修饰的不完全重编程是造成克隆效率低和克隆动物发育异常的主要原因。基 因组印记是由等位基因表观遗传修饰的不对称导致的，其中DNA甲基化是调控印 记的一种重要方式，许多印记基因上都有差异甲基化区(differentiallymethylated 程的重要内容。 Dlkl-Di03印记区域在胚胎发育过程中起非常重要的作用，然而由于缺少基因 序列以及多态性信息，Dlkl-Di03区域在牛中印记的分子机制以及在体细胞核移植 牛中的重编程还没有被研究。本研究在建立正常牛Dlkl-Di03印记区域中 Me98(Matemallyexpressedgene8)基因及IG．DMR(the 因特异的DNA甲基化状态的基础上，分析其在体细胞核移植牛中的重编程，为揭 示牛中Dlkl-Di03区域印记的分子机制和寻找体细胞核移植牛发育异常的原因提供 依据。 对Me98基因序列分析发现，其5’端没有显著的CpG岛，而在内含子3处存在一个 CpG岛，为了确定该基因内部CpG岛的甲基化在调控Me98基因印记中的可能作用， 甲基化状态进行了分析发现两条亲本链C链和T链的甲基化程度都比较高，但是T 链甲基化程度还是显著高于C链的(P0．05)，并且结果显示C链的甲基化模式只 有一种。对出生48小时死亡的体细胞核移植牛肺脏中Me98基因内含子3的甲基化 甲基化程度在正常牛和体细胞核移植牛中都比较高，但是体细胞核移植牛甲基化程 度还是显著高于正常牛的甲基化程度(PO．05)，而且甲基化模式在体细胞核移植牛 个体中发生明显变化，只有一种完全甲基化的模式，而Me98基因在体细胞核移植 牛个体中表达没有紊乱，仍表现为单等位基因表达，初步推测内含子3处CpG岛 的甲基化没有参与调控Me98基因的表达。 繁殖牛染色体特异的甲基化状态，发现C链与G链的甲基化程度都很高(90．22％ 和87．oo％)，且差异不显著，说明这几个CpG位点的甲基化不参与印记调控；在体 化整体水平显著低于正常对照组，说明体细胞核移植牛中该区域DNA甲基化的重 编程异常。 关键词：体细胞核移植；牛；印记基因；Me98；DNA甲基化；DMR DNA statusof andIG-DMRwithin methylationMe98gene Dlkl-Di03 imprinted domain inclonedbovines Master candidate：Hu Jiaqi andmolecular Major：Biochemistry biology Supervisor：LiShijie Abstract Somaticcell nuclear been to transfer(SCNT)has successfullyappliedmany mammalian thelow ofSCNTand species，butefficiency