CD28分子的隆表达及CD28核糖体单链抗体库的构建.pdfVIP

摘 要 本研究旨在应用核糖体展示技术筛选出与人的CD28分子特异性结合的单 链抗体，以期CD28单抗能更好的应用于肿瘤的免疫治疗。 首先，从Jurkat细胞中得到cD28分子的基因，经过酶切连接入表达载体 pET28并进行原核表达。 以原核表达纯化的重组CD28蛋白抗原免疫Balb／c小鼠，每隔两周免疫一 次，共免疫4次。免疫后，取小鼠脾脏并分离总I斟A，设计简并引物，逆转录 PCR，经linker DNA连接形成抗CD28单链抗体库。 从构建的抗CD28单链抗体库中，应用核糖体展示技术筛选抗CD28的单 链抗体。所构建的单链抗体库，经过体外转录翻译后，形成“单链抗体一核糖体 为抗原进行筛选。经过三轮筛选，ImPCR扩增单链抗体片段，并连接到 cDZfDH pET43．1a表达载体中。转化E5a，挑取单克隆，用鉴定为阳性的重组 子转化E∞Zi ELISA检测表达的单链抗体对CD28分子的亲和力。 我们以重组表达的人CD28蛋白为抗原进行核糖体展示筛选，经过三轮筛 选后，获得了一株对人CD28有高特异性亲和力的单链抗体。为抗CD28单链 抗体用于双特异性抗体的制备及其在T淋巴细胞增殖等方面的应用研究提供了 基础。 关键词：核糖体展示；单链抗体；抗体库：肿瘤免疫治疗 Abstract Inthis waSusedt0select Ch咖 study，ribosomediSplaytec}molog)r single 纽tibodies forh眦an t0 billdingspecifically CD28．The觚ti—CD28scFv can雕fer tumor． of using洫immuno也erapy were Balb／crnice in吼疵zed4times埘th mRNA CD28趾ti鲫prote洫．ne Ⅵ郴isolated6．om也e ofinlmunizedmice．ThecDNA、抛s spleenS general．ed by and1cChain and reVerse吣cription．HeaVy K)、vereaIllplified genesⅣH s印arately， anda砸一CD28 chaill coIlstmcted single antibodies(scFV)libr锄y、VaSbyaSsenlbling a liIll【er Ⅶa11dK砬oVH／Kchain晰m conStmctedDNA PCR． specially byovcrlap Tk曲osome uSedtoscreen anti—CD28 displaytecllll0109y、ⅣaS specific