ITSN2-LRABEP1的相互作用及功能研究.pdfVIP

摘 要 (adaptorprotein)，在细胞的胞吞胞吐、信号转导、受体降解和细胞 生存中起着重要作用。现在已发现两个ITSN同源蛋白——ITSNl和 细胞，ITSN．L则主要在神经组织中表达。研究表明，ITSN能够参与 胞吞胞吐作用，在神经元细胞中对维持神经递质的释放起重要作用， 此外ITSN还参与细胞内信号传导通路的调节。 本文用酵母双杂交的方法筛选得到10个与ITSN2．L的CC结构 域相互作用的蛋白，我们选择了重复数最多的，克隆并表达了 用，而且免疫共沉淀的结果表明在HeLa细胞系中过表达的ITSN2．L 与RABEPl蛋白能够处于同一复合体中，同时发现HeLa细胞系中， 内源、外源表达的ITSN2．L蛋白与RABEPI有明显的共定位。结果 表明这两种蛋白能相互作用，通过这样的结合完成复杂的调节功能。 本文还对ITSN2．L与RABEPl蛋白的功能进行了初步探索，发 现ITSN2．L过表达可以导致RABEPl蛋白通过蛋白酶体途径降解， 的过表达对RABEPl过表达所产生的巨大囊泡有抑制作用。这些结 111 蛋白量的变化，进而参与囊泡的转运过程。 关键词：ITSN，RABEPl，泛素化，胞吞，囊泡转运 1V ABSTRACT Human akindof and intersectin，is ITSN，namely adaptorprotein functions rolesin and important endocytosis andcellsurvival．TherearetwoITSN degradation transport，receptor orITSN2 hastwo p玎0tein——ITSNl和ITSN2，ITSNlrespectively isoforms：ITSN1-S、ITSN2一S、ITSN1-L和ITSN2一L．ITSN—Sis widely in tissuesand ITSN-Lis in many cells，and mainlyexpressed expressed neuraltissues．StudiesrevealedthatITSNare in participatedendocytosis and thereleaseoftransmeterin also exocytosis，maintaining neuron,and in regulatingsignalingpathway． ToidentifypotentialITSN2一L—interactingpartners，ayeast was inhumanbraineDNA screen two-hybrid performed library．We demonstratedthenovelITSN2··L·-RABEP1 interactioninvitroGST