L-精氨酸高产株选育与发酵工艺研究.pdfVIP

STUDYOFHIGHYIELDL．ARGDⅡNEPRODUCTINGSTRAIN ANDFERNⅡNTATIONCONDITION ADissertation SubmittedtotheCommitteeof Normal Zhejiang University Forthe of Degree MasterofScience Yu By Xiangpeng Prof．JinHairu Supervisedby May,2012 9㈣3588 L一精氨酸高产菌株选育与发酵工艺蜀㈣Y21 摘要 L．精氨酸是人体半必需氨基酸，在绝大多数微生物中都能自身合成，目前广 泛应用于食品及医药行业，多采用发酵法大规模生产。本文以真菌为研究对象， 对不同样品中的真菌进行了L．精氨酸高产菌株的筛选，从红曲米中分离出一株 高产L．精氨酸菌株红曲霉H13，其初始发酵液中L．精氨酸产量为1．67 g／l。对其 进行形态鉴定及分子鉴定确定其为紫红曲霉。进一步对该菌株进行了最佳发酵培 养工艺选择、诱变育种、代谢控制发酵、细胞膜通透性调控等研究，围绕提高发 酵液中L．精氨酸产量，菌丝体中L．精氨酸含量及菌丝体生物量，最终获取大量 L．精氨酸。研究结果如下： 通过单因素实验对其液体发酵进行初步优化研究。结果表明，最佳碳源是可 溶性淀粉，最佳浓度为10％，最佳氮源是蛋白胨，最佳浓度为3％，最佳pH值 ml／250 r／min， 4．5，温度30℃种子培养时间为18h，摇瓶装液量50 ml。转速为120 发酵时间7d。在此条件下进行发酵培养，所得发酵液产L．精氨酸4．08 g，l，菌丝 体干重为lO．32 g／l，菌丝体中L．精氨酸含量(均以干重计)为24．17mg／g。 为进一步提高L．精氨酸产量，利用紫外及硫酸二乙酯对H13进行逐级诱变 筛选L一精氨酸结构类似物抗性突变株，解除终产物反馈抑制，利用复合诱变筛 选磺胺胍抗性突变株，以增加向L．精氨酸途径的代谢流。最终获得一株高产菌 株HUD43，其L．精氨酸产量可达10．43 g／l，菌丝体生物量可达24．39∥l，L-精 氨酸含量达到28．72 medg。与出发菌株H13相比，L．精氨酸产量、生物量及L一 精氨酸含量分别提高155．64％、136．33％和18．82％。 J下交试验， 选取可溶性淀粉、蛋白胨、温度、pH值四个主要因素进行L9(3)4 5．5、温度28℃。此 进一步优化，最优组合为可溶性淀粉10％、蛋白胨4％、pH 条优化件下进行发酵，其发酵液产L一精氨酸进一步得到提升到11．33g／l，菌丝体 干重达到28．47 g／l，菌丝体中L．精氨酸含量(均以干重计)为28．63