Marker-ree转基因番茄表达外源植物甜蛋白ThaumatinⅡ.pdfVIP

学 RSlTY Academic For：Master DegreeApplied Degree ofScience Cultivation Normal Units：Zhejiang University of Zhej AcademyAgricultural iang Sciences Normal GrantingUnits：ZhejiangUniversity 0 May，201 Marker-free转基因番茄表达外源植物甜蛋白 Thaumatin ll 摘要 番茄(SolanumlycopersicumL．)是最重要的蔬菜作物之一，随着番茄遗传学 SolanaceaeGenome 研究和国际茄科基因组计划(Intemational Project，SOL)的 发展，番茄已成为转基因研究的理想模式植物。植物甜蛋白Thaumatin甜度高、 甜味纯、热量低、口感好、无毒害，被消化后可降解为人体所需的各种氨基酸， II 具有增进或改善食品风味的功能。选择番茄作为生物反应器来生产Thaumatin 有着巨大的商业潜力：首先容易实现外源目的基因的转化；其次，外源基因的 成功转入可以提高番茄果实甜味、改善果实品质；第三，借助番茄的高产量进 II甜蛋白，降低了ThaumatinII食品添加剂成 行大量、低成本地生产Thaumatin 本。本文拟以番茄为材料通过转基因技术将ThaumatinII基因通过农杆菌介导法 导入番茄，从而提高番茄的果实品质。本论文的研究内容及结果如下： 1．通过对分化和生根培养基的筛选，我们建立了高效的番茄再生体系。统 计结果表明0．2mg／L IAA配组时分化再生效率最高，而且NAA ZT和1．0mg／L 为0．05mg／L时生根效果最好； 2．以番茄的无菌苗子叶为外植体，以抗卡那霉素的Ⅳ，驴II作为选择标记基 因，通过根癌农杆菌介导法，将甜蛋白ThaumatinII基因导入番茄中，共获得了 10株独立的抗性转化株系； 3．对获得的10株独立的To抗性转化株系进行PCR鉴定，10个转化株系 PCR都检测得到预期的特异条带；进一步采用Southem杂交对其中To代的 Thau-10转化株进行插入确认； Karl的1／2 4．将获得转基因Tl的Thau-2和Thau．4种子播种到含有200mg／L MS培养基上进行遗传特性分析，结果表明转基因株系Thau-2及Thau．4抗性植 摘要 株和非抗性植株比例均接近3：1，推测两个株系均为单拷贝插入； Marker-free苗，初步结果表明以