L-选择蛋白与化因子受体CXCR4在小鼠恶性淋巴瘤P388D1细胞中相互作用关系的研究.pdfVIP

L．选择蛋白与趋化因子受体CXCR4在小鼠恶性淋巴瘤 P388D 1细胞中作用关系的研究 硕士研究生：李夏妍 指导教师：张嘉宁 教授 专业名称：生物化学与分子生物 摘 要 实验背景 肿瘤严重威胁人们的生命健康，肿瘤之所以治愈率差的关键原因在 于其转移程度，分化程度和不可根治性，因此对于肿瘤转移机制的研究 尤为重要。 L．选择蛋白为I型跨膜糖蛋白，其N．末端的C型凝集素样结构域， 又称糖识别域，可以结合糖配体。Fucoidan是L．选择蛋白的天然糖配体， 具有硫酸化结构，可以与L．选择蛋白结合，促进细胞的迁移和黏附能力。 此外。L．选择蛋白在淋巴细胞归巢，自细胞在内皮细胞的滚动，黏附中发 挥重要的生物学作用。新近研究发现，L．选择蛋白与甘露糖受体(mannose receptor，MR)结合可能介导肿瘤细胞的淋巴道转移，而且恶性淋巴瘤 P388Dl细胞的淋巴道转移依赖于L．选择蛋白的表达。 趋化因子是一类小分子促炎因子，小分子蛋白多肽，可由多种细胞产 生。CXCR4是趋化因子CXCLl 2(SDF．1)的特异性受体，它不仅表达于细 胞表面，也可在胞浆中检测到。CXCR4在中枢神经系统、免疫系统和将 HacP细胞分泌基质金属蛋白酶的能力，从而影响它们转移潜能(2倒。 已有研究发现。在正常人血液中T淋巴细胞上存在L．选择蛋白和 CXCR4的表达，当L．选择蛋白与其天然配体结合后会引起下游信号传导， 导致细胞内的CXCR4瞬间聚集到细胞表面，这种现象可导致细胞迁移能 力和淋巴结黏附能力增强12J。 P3 88Dl细胞是小鼠恶性淋巴瘤细胞，属于淋巴系统的肿瘤细胞，其表 面也存在L．选择蛋白和趋化因子受体CXCR4的表达。并且已有研究证 明在淋巴结内皮上有L．选择蛋白配体的表达，那么当与L．选择蛋白结合 以后．是否会使小鼠恶性淋巴瘤P388Dl细胞膜上的CXCR4表达上调，促 进肿瘤细胞通过高内皮静脉(HEVs)从血管进入淋巴结，进而影响肿瘤 的淋巴道转移。 ． 实验目的 本文以恶性淋巴瘤P388D1细胞为研究对象，使用L．选择蛋白的天然 配体Fucoidan刺激P3 88D1细胞后，观察L．选择蛋白与趋化因子受体 CXCR4之间的相互作用关系及功能变化，进而探讨其与肿瘤淋巴道转移 的分子机制。 实验方法 细胞，经SDF-1诱导，通过钙离子内流实验，检测具有功能性CXCR4的表达 88D 量的变化，Hca—F细胞对照；使用具有硫酸化结构的肝素作用P3 1细胞， 照；使用L一选择蛋白表达缺失的Hca．F细胞，瞬时转染L．选择蛋白后，在用 Fucoidan作用于该细胞，检测具有功能性CXCR4的表达量的变化 2)使用Fucoidan作用P388Dl细胞后，SDF．1诱导，明胶酶谱检测基 质金属蛋白酶MMP2和MMP9分泌。 实验结果 1)趋化因子受体CXCR4和L．选择蛋白在P388D1细胞上均有表达， 对照Hca．F细胞中CXCR4有表达，L．选择蛋白表达缺失。 88D1细胞后，细胞 2)当用L．选择蛋白的天然配体Fucoidan作用P3 膜上具有功能性的CXCR4的表达量升高，并且具有剂量依赖性，而对照 P388D l细胞，发现细胞膜上具有功能性的CXCR4的表达量升高，对照壳 寡糖没有变化；当用L．选择蛋白质粒瞬时转染HcaF细胞后，在用L．选择 蛋白的天然配体Fucoidan作用于该细胞，发现转染后的细胞胞膜上具有 功能性的CXCR4的表达量升高。 3)明胶酶谱显示的实验结果表明，在L．选择蛋白的天然配体 Fucoida