LINE-1 #39;非编码序列(5#39;-UTR)在HepG2细胞中的功能研究.pdfVIP

中文摘要 region) 在肿瘤细胞中的作用机制。 HepG2细胞中，通过荧光素酶报告基因的表达研究其具有的双向启动子的活性， 并通过构建不同长度的突变体比较其结构对活性的影响；基于我们的发现，我们 分析了启动子不同活性的结构基础，并对差异区域可能生成的miRNA761进行了 表达的影响。为进一步探索LIb／E-1序列中的5’．UTR的作用机制以及可能与 L1．ORFlp之间的关系，我们通过共同转染，检测转染细胞基因组中L1—5’UTR的 合体)珍惜爱细胞中有共定位现象，我们推测L1．ORFlp可能与RISC中的重要组 分存在相互作用，为此我们通过免疫共沉淀技术检测ORF．1p和AG02蛋白之间 是否形成蛋白复合体。 结果：正向不同长度的5’．UTR序列均具有启动子的活性，且680bp的5’．UTR 长次之，400bp长度的活性最低；反向5-UTR序列的启动子活性低于正向；重组 控中没有发挥作用。L1．ORFlp对5’．UTR序列有抑制作用，这种抑制作用不是通 过基因组的甲基化，而可能是通过影响乙酰化组蛋白的分布方式调控的，其作用 机制需要进一步的探索；另外，ORF．1p与AG02蛋白之间存在相互作用，从而可 能对AG02的活性造成影响。 结论：5-UTR序列具有启动予活性，且不同长度的序列，其正义链启动子活 性在保留其5‘端680bp时最强，提示5‘U瓜全长在3’端存在对其活性抑制的 区域，反义链启动子有一定的活性，强度约为正向启动子的八分之一。ORF．1p对 LINE-1的5’一UTR的抑制是通过两种方式调控的，一是通过乙酰化组蛋白的分布 加工生成。这些具体的机制还未见报道，对了解肿瘤发生、发展和调控的分子机 理以及肿瘤药物靶标具有重要意义。 关键词：LINE-l；5’一UTR；ORFl．p；AGO一2。 分类号：Q7 ABS硼眦T ABSTRACT：Aim：Tothefunctionof explore 5-UTR(5’-untranslatedregion)of nuclear in cancercelk． LINE-1(bnginterspersedelements-1)RetmtmnsposonHepG2 Methods：Differentof5-UTRwere andcbned lengths prepared including400bp， and conventionalmolecular thewhole 680bp length903bpbyusing cloningtechniques． recombmentwereconstructed these Sunsequently,theplasmids byinsertinggene into harboredtheluciferase fragmentsrespectivelyreportplasmid gene．Bytransfecting intoHuman oflucifemsewere theseconstructs expression hepatoma(HepG2)cell，the detected．ThecommercialmicroRNA761kitWaS chemical preparedby synthesized．