POLD1-sRNA对细胞骨架及细胞迁移的影响.pdf

EFFECTSOFRNA INTERFERENCE SILENCINGPOLD1 GENEON CYTOSKELETONANDCELL MIGRATION ADissertationin Phytology Underthe ofProfessor Supervision Shao Linxiang By Lumin Zhang Normal Zhejiang University Jinhua，Zhej iang，China May,2014 万方数据 POLDl一siRNA对细胞骨架及细胞迁移的影响 摘要 DNA聚合酶d(DNApolymerase p125催化亚基上具有聚合酶活性和外切酶活性。研究发现，POLDl基因异常表达与肿 瘤的发生和发展有着直接的关系，但POLDl与肿瘤迁移相关性的作用并不清楚。本研 RNA Liver 究采用小RNA干扰(small Liver3 Liver3 株细胞骨架与细胞迁移的相关性。 实验方法： 验检测细胞迁移能力。 2．POLDl．siRNA转染细胞72h后，倒置显微镜观察活细胞形态。 3．免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架中微管、微丝和中间丝及其相 胞中的分布及表达量。 达量，Western Blot技术检测p125、B-actin等蛋白表达量。 实验结果： Liver细胞72h后，对HeLa、 1．POLE}1．siRNAl转染HeLa、HUVEC和Chang p0．05)；对ChangLiver细胞的抑制率为21．32％，细胞活力极显著下降p0．01)。 Liver细胞后，对HeLa细胞的抑制 POLDl一siRNA2转染HeLa、HUVEC和Chang 万方数据 摘要 Liver细胞活力没有 率为17．85％，细胞活力极显著降低0O．01)；但对HUVEC和Chang 显著性差异p0．05)。 细胞迁移，48h后抑制能力减弱，有促进迁移的趋势；HUVEC细胞的划痕修复速度加 快，迁移能力增强；而ChangLiver细胞的划痕修复能力明显减慢，迁移能力下降。 不对称分布，细胞迁移前缘中微管结构稳定，数量增多，决定细胞迁移的方向。细胞膜 处微丝聚集、延伸，使细胞膜表面突起，形成丝状伪足、片状伪足，