RGD-重组蛛蛋白聚己内酯复合支架材料的研究.pdfVIP

摘要 中文摘要 聚己内酯(PCL)是一种新型脂肪族聚酯，以其良好的机械性能、无毒性、可塑性 等优良性能广泛应用于生物材料领域，但材料表面缺乏细胞识别位点，对细胞的亲 和力不够，植入体内会引起炎症反应等成为制约其作为理想组织工程材料的主要障 碍。蛛丝蛋白纤维作为高性能生物材料具有十分诱人的应用前景。国外对蛛丝蛋白 作为生物材料的研究报道较少，国内以蛛丝蛋白为材料锖IJ备组织工程生物材料除本 课题组外尚未见相关报道。应用现代生物技术和高分子物理化学手段将具有特定细 蛋白质和高分子材料两方面的优异性能。采用冷冻干燥／粒子滤粒法和静电纺丝技术 制备pNSRl6／PCL复合多孔支架和纳米纤维支架，对复合支架材料结构、理化性能进 行分析，并对其降解性能和生物学性能进行研究，得到～类综合性能优良的组织工 程新材料。 冷冻干燥／粒子滤粒法制备pNSRl6／PCL多孔支架材料的最佳制作配比和工艺 是：溶液浓度0．39／IIlL、致孔剂NaCl用量O．59、粒径为150—250um，可以制得 lI 孔径达到100m以上pNSRl6／PCL多孔支架，支架孔径能基本满足常规细胞培养的 要求；电纺过程参数控制纺丝液浓度30％、电压80kV、固化距离20cm、挤出速度 5ml／h条件下可获得粗细均匀的pNSRl6／PCL复合纳米纤维。 红外光谱分析表明pNSRl6与PCL以物理方式共混，二者之间并未形成新化学键。热 性能测试结果表明66．5℃为支架材料的熔点(或软化点)，416．7℃对应为热分解温 度，添加pNSRl6并未影响PCL的热性能。力学性能测试结果表明，多孔支架制作过 程中致孔剂的加入提高了支架材料的力学性能，静电纺丝可明显提高支架材料的力 学性能。对多孔支架及纳米纤维支架的孔隙率和吸湿性进行测试比较发现，静电纺 纳米纤维膜的孔隙率平均达90％，吸湿性达3．Og／g以上，而浇注多孔膜孔隙率平均 仅达到81％，吸湿性仅1．5g／g，电纺丝技术可以有效的提高pNSRl6／PCL复合膜作 为生物敷料的相关性能指标。选择磷酸盐溶液、含猪胰脂肪酶的磷酸盐溶液，通过 摘要 架材料的降解与材料的大小及表面积有关，纤维膜降解速度较多孔膜快。说明 pNSRl6／PCL复合支架具有一定的生物可降解性。 胞毒性，并通过NIH．3T3细胞与支架复合培养考察其对细胞黏附、生长和分化的影 细胞毒性评定标准，分析pNSRl6／PCL复合支架材料毒性等级在1级以下，符合生物 细胞黏附，细胞在材料表面增殖形成多层结构。细胞在纳米纤维膜上生长呈现一定 的方向性，但是基本停留在膜表面生长，并未见伸入膜孔隙内部，而在浇注多孔膜 上不仅在表面大量扩增，且逐渐伸入孔隙内部。细胞支架粘附率及增殖曲线测定结 米纤维膜高于pNSRl6／PCL复合浇注多孔膜。细胞在各组支架上均能正常增殖，在 PCL材料上增殖速度较慢，在pNSRl6／PCL复合纳米纤维膜上刚开始增殖较快，以后 则因为空间限制细胞增殖速率较多孔膜慢。免疫组化实验结果说明NIH-3T3细胞在 各组支架上均可正常表达bFGF因子。说明RGD-重组蛛丝蛋白明显改善了PCL材料 的细胞相容性，该复合材料具备种子细胞生长、增殖的微环境，初步认为可进一步 应用于组织工程各领域。 以医用胶原为对照，将各组支架材料植入SD大鼠肌肉，观察机体的炎症反应 和材料在体内的变化。pNSRl6／PCL复合支架材料以及医用胶原在术后30d根据评定 标准，均呈I级-II级反应，评价为合格，材料局部炎性反应消退，炎症细胞基本 消失，肌纤维结构排歹IJ有序，纤维囊壁趋向变薄，有大量新生血管出现。组织相容 pNSRl6／PCL复合支架材料具有良好的生物相容性和生物可降解性，与组织无排斥作 用，能减轻炎症反应，初步认为其作为组织工程支架材料具有一定的可行性。 关键词：聚己内酯RGD．重组蛛丝蛋白支架降解细胞相容性组织相容性 II 中文文摘 中文文摘 聚己内酯(PCL)以其良好的生物可降解性和可塑性等优势广泛应用于生物材料 领域。但材料表面缺乏细胞识别位点，对细胞的亲和力不够，材料表面的亲水性差 等成为制约其作为理想组织工程支架材料的主要障