Saccharmonospora viridis α-葡萄糖苷酶基因的功能鉴定及分子改造.pdfVIP

viridis 0【一葡萄糖苷酶基因的功能鉴定及分子 Saccharomonospora 改造 摘要 物的非还原末端催化水解0【．葡萄糖基酶的总称。该酶是工业上生产低聚异 麦芽糖的关键酶制剂，低聚异麦芽糖是一种功能性低聚糖，具有良好的促 进双歧杆菌生长、降低血脂和抗龋齿等生物性功能，已广泛应用于食品、 医药等领域。因此，O【一葡萄糖苷酶在低聚异麦芽糖的工业生产上受到了极度 的关注。 为糖苷酶的ORF，并成功在E．coli 化，SDS—PAGE电泳检测纯化的目的蛋白条带约为53kD。重组酶作用于对 mmol／L和6．05 最适pH均为7．5，Km值分别为2．32 mmol／L，比活力分别 为911．68 89．80 U／mg和1 U／mg。该酶能够水解pNPG、蔗糖、麦芽糖和麦 芽三糖，但不能水解海藻糖、’Gt一环糊精、p．环糊精、普鲁兰糖、可溶性淀粉、 糯米淀粉。 建模，以Pseudomonas 变，以期提高a．葡萄糖苷酶的酶活力或改变产物特异性。通过反向PCR和 利用底物pNPG对突变酶进行酶学性质研究发现，与野生酶相比较，突变 的最适温度分别升高和降低了5℃，而R266I的最适温度却没有发生变化； 力加强了，其余两个突变酶的Km都有所升高而降低了与底物pNPG的亲。 和力。HPLC分析结果表明，突变酶和野生酶分别与10％麦芽糖作用，均发 生了一定转糖苷反应，但突变酶的转糖苷活力均比野生酶的低，并且产物 并没有发生改变。 关键词：绿色糖单孢菌O【一葡萄糖苷酶克隆表达酶学性质定点饱和突 变 FUNTIONALIDENTIFICATIONANDMOLECULAR MODIFICATIONOFTHEALPHA—GLUCOSIDASEGENEFROM SAccHARoMoNosPoRAVIRU)Is AB STRACT akindof that Q—glucosidase(EC3．2．1．20)isa—glucosylenzymescatalyzes the ofthe bondsfromthe endofsubsrates． hydrolysisO【一glycosidic non—reducing Itisa forindustrial of keyenzyme production isakindoffunctional has good iso—maltooligosaccharideoligosaccharide，which features，for the to bifidobacteria biological examplepromoting grow，reducing the andanti—cariesandSOon．Ithasbeen infood，medicine lipids widelyapplied andother in industrial