STAT3及相因子在白藜芦醇抗原发性脑肿瘤作用中的意义分析.pdfVIP

STAT3及其相关因子在白藜芦醇抗原发性脑肿瘤 作用中的意义分析 硕士生姓名： 王建民 辛旨导教师： 刘 佳 教授 指导小组： 李 宏 教授 舒晓宏 副教授 专业名称： 生物化学与分子生物学 摘 要 目的：在髓母细胞瘤细胞系UW228．3细胞和胶质母细胞瘤细胞系 LN．1 STAT3和细胞的生长、分化、凋亡与耐药之间的关系，探讨白藜芦醇在 抗髓母细胞瘤和胶质母细胞瘤作用中的分子机制，为改善髓母细胞瘤和 胶质母细胞瘤的临床化学治疗现状提供新的实验室指标和理论根据。 方法：人髓母细胞瘤细胞系UW228．3细胞和胶质母细胞瘤细胞系 LN．1 Modified 8细胞分别培养于含lO％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s x1 Medium)培养液中，以504／ml的初始细胞密度接种于060mm Eagle’s l 和mOOmm的培养皿中，24小时后用l 00I，tM白藜芦醇进行处理。将白 的浓度储存，使用前稀释到100l_tM。用1 处理细胞48小时，观察其对细胞的作用效果。为便于观察细胞形态学特 征和进行免疫细胞化学(ICe)染色，将无菌盖玻片预先置于培养皿底部 制备细胞爬片，待取出时用100％冷丙酮进行固定。同时收集细胞悬液 并离心沉淀以用于RNA和蛋白质的提取。采用免疫细胞化学、RT．PCR 胶质母细胞瘤细胞系LN．1 Survivin、Cox．2、CyelinDl和Bel-2在100I_tM白藜芦醇处理前后表达水 平的改变、细胞内的分布状况及其与分化和凋亡的关系。 结果：1)用l00p,M白藜芦醇处理细胞48h时后，对白藜芦醇敏感 的髓母细胞瘤细胞系UW228．3细胞形态发生明显改变，而白藜芦醇并不 能引起胶质母细胞瘤细胞系LN．18细胞形态的变化。2)在髓母细胞瘤细 胞系UW228．3细胞中，白藜芦醇可以下调STAT3的表达水平并且使其 核易位程度明显减少，而在胶质母细胞瘤细胞系LN一18细胞中，白藜芦 醇可使STAT3发生核易位但对STAT3表达水平的影响很小。3．)白藜芦 醇可以明显上调髓母细胞瘤细胞系UW228—3细胞中LIF的表达水平，而 对胶质母细胞瘤细胞系LN．18细胞中LIF表达水平的影响甚小。4)在髓 母细胞瘤细胞系UW228．3细胞中，1 00}tM白藜芦醇可不同程度地下调 平，而在胶质母细胞瘤细胞系LN．18细胞中1 00I_tM白藜芦醇对c．Mvc、 Survivin、Cox．2、CyclinDl和Bcl．2表达水平皆无明显影响。 结论：1)本研究证实100I_tM白藜芦醇在诱导髓母细胞瘤细胞系 UW228-3细胞发生分化和调亡的同时，抑制了STAT3通路的活化，而在 胶质母细胞瘤细胞系LN．1 8细胞中白藜芦醇未呈现其抗肿瘤作用但是 作用较敏感，而胶质母细胞瘤细胞系LN．18细胞对白藜芦醇的作用则具 有耐药性。3)本研究进一步证实了对STAT3信号转导通路的抑制是白藜 芦醇抗原发性脑肿瘤作用的重要分子机制。 STAT3 关键词：白藜芦醇 髓母细胞瘤 胶质母细胞瘤 药物敏感性 2 ofSTAT3andits related Significance factorsin