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SYK基因对奶乳腺上皮细胞增殖的影响研究.pdf
目 录
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摘要……………………………………………………………………………………………………………………………．I
英文摘要………………………………………………………………………………………．III
1前言………………………………………………………………………………………………………………………l
1．1奶牛乳腺发育及泌乳机制………………………………………………………………．1
1．1．1奶牛乳腺发育………………………………………………………………………．．1
1．1．2奶牛乳腺泌乳机制…………………………………………………………………一2
1．2细胞增殖的研究进展……………………………………………………………………．．2
1．2．1细胞增殖与乳腺发育和泌乳…………………………………………………………2
1．2．2影响细胞增殖的信号分子……………………………………………………………3
1．3SYK基因的研究进展……………………………………………………………………．．5
1．3．1SYK简介……………………………………………………………………………．5
1．3．2
SYK的主要生物学功能………………………………………………………………6
1．3．3SYK基因对细胞增殖的调节…………………………………………………………6
1．4研究的目的与意义………………………………………………………………………．7
2材料与方法……………………………………………………………………………………8
2．1实验材料、试剂及仪器…………………………………………………………………．8
2．1．1实验动物的选取……………………………………………………………………．．8
2．1．2主要试剂……………………………………………………………………………一8
2．1．3所需试剂的配制……………………………………………………………………一9
2．1．4主要仪器……………………………………………………………………………11
2．2奶牛乳腺组织中SYK的表达与定位研究………………………………………………11
2．2．1奶牛乳腺组织总蛋白的提取………………………………………………………．．11
2．2．2Western
blotting检测奶牛乳腺组织中SYK的表达含量…………………………．12
2．2．3免疫荧光检测奶牛乳腺组织中SYK的表达部位…………………………………．13
2．3SYK基因对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响研究………………………………………．．14
2．3．1奶牛乳腺上皮细胞培养……………………………………………………………．14
2．3．2奶牛乳腺上皮细胞的鉴定…………………………………………………………．14
2．3．3 5
SYK基因沉寂检验基因功能………………………………………………………．．1
2．3．4SYK基因过表达检验基因功能……………………………………………………．．17
2．4SYK基因调节细胞增殖的机制…………………………………………………………．22
2．4．1奶牛乳腺组织基因组DNA的提取…………………………………………………22
2．4．2AKTl基因启动子区引物的设计……………………………………………………23
2．4．3
AKTl基因启动子区PCR扩增……………………………………………………一23
2．4．4PCR产物纯化………………………………………………………………………24
万方数据
东北农业大学理学硕士学位论文
2．4．5提取质粒……………………………………………………………………………24
2．4．6带粘性末端质粒的制备……………………………………………………………．24
2．4．7连接与转化…………………………………………………………………………25
2．
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