UCP2同向调ATP、ROS作用的初步研究.pdfVIP

UCP2同向调控ATP、ROS作用的初步研究 硕士生姓名： 贾晓丽 指导教师： 邹 原教授 专业名称： 生理学 摘 要 目的：线粒体是细胞能量代谢的中心，同时也是细胞内活性氧 (reactive oxygen 2，UCP2)是1997年发现的线粒体内膜上的质子转 (uncouplingprotein 运蛋白，广泛分布于人类及啮齿类动物多种组织器官中。UCP2具有很高 的质子转运活性，能使质子直接进入线粒体基质而不参与ATP的合成， 使氧化磷酸化解偶联，ATP合成减少：同时由于线粒体内膜两侧质子梯 度降低和呼吸链电子漏减少，活性氧产生减少。 UCP2自被发现以来，对其抗自由基作用和调节能量代谢作用研究较 多，但极少数研究将二者结合起来。线粒体产生ROS的过程与氧化磷酸 化过程一样是线粒体固有的、必然的和同等重要的功能。根据UCP2的 偶联效应提高，ATP水平降低，同时因线粒体内膜两侧质子梯度降低， 膜电位、电子漏降低，ROS的生成也降低：反之，UCP2解偶联效应降 低，ATP水平升高，ROS水平也升高。然而，因解偶联效应改变引发的 ATP、ROS同向变化，在细胞功能和抗损伤的作用分析中似有矛盾和不 解之处：若UCP2低表达、解偶联效应降低，ATP增加但ROS也增加， 可能导致细胞损伤；若UCP2高表达、解偶联效应增强，ROS减少但ATP 也降低，可能导致细胞功能降低，对损伤的耐受能力也会下降。UCP2 到底扮演什么角色?究竟是UCP2高表达还是低表达对细胞正常功能的 维持有利?高水平ATP和低水平ROS在细胞抗损伤中哪一个可能有更为 变化，为UCP2生理意义的探明提供了重要的实验依据。 Liver作为实验对象，用含1O％胎牛血 方法：将正常肝细胞株Chang 清的RPMI．1640培养液，37℃、5％C02恒温孵育箱培养，隔天换液一次， 0．25％胰酶EDTA消化传代。常规培养2．3代后，待细胞状态良好时开始 进行实验。应用京尼平(genipin)作为UCP2特异性抑制剂。将细胞分 为四组，分别为对照组、京尼平251．tM组、京尼平501．tM组、京尼平l001．tM 组，对照组正常换液，给药组分别给与不同浓度的京尼平作用40min后， 用荧光分光光度法检测细胞线粒体膜电位和细胞内总ROS的含量：用荧 光虫素酶生物发光法测定ATP含量；通过免疫细胞化学的方法检测张氏 肝细胞内UCP2的表达。 结果： 1．通过免疫细胞化学方法检测，可见张氏肝细胞内阳性染色，表明 张氏肝细胞内有UCP2表达。京尼平作用后，UCP2表达有减少的趋势。 2．给与不同浓度京尼平作用40min后，京尼平处理组与对照组相比， 肝细胞线粒体膜电位水平显著升高(P0．001)，且具有剂量依赖性。 3．给与不同浓度京尼平作用40min后，京尼平处理组与对照组相比， 肝细胞内ROS水平显著增加(PO．001)，且具有剂量依赖性。 4．京尼平作用40min后，京尼平处理组与对照组相比，肝细胞内 ATP水平显著增加(P0．05)。 结论： 1．正常张氏肝细胞内可见UCP2阳性表达，京尼平作用后，UCP2 表达有减少的趋势。 2．京尼平能够增加张氏肝细胞的线粒体膜电位，且有剂量依赖性。 3．京尼平能够使张氏肝细胞的ROS、ATP水平产生增加。 关键词：解耦联蛋白2 活性氧 三磷酸腺苷 2 ofATPand APilot on ROS SyntropicRegulation Study 2in Protein