Nothc1在外诱导胃腺癌细胞凋亡及其作用机制研究.pdfVIP

·中文论文摘要· Notchl在体外诱导胃腺癌BGC823细胞 凋亡及其机制研究 ．^』．-JL 刖 昌 胃癌(Gastric carcinoma)是常见恶性肿瘤之一。研究发现肿瘤的发生发展、 转移、复发都涉及到基因的改变，其中包括原癌基因的激活以及抑癌基因的失活 等。因此，研究与癌症相关的基因可以为诊断、治疗和防止癌症复发提供理论依 据和实验基础。在众多与肿瘤相关基因中，Notch途径与肿瘤的密切关系引起关注。 自从二十世纪初在果蝇中发现Notch基因——因其部分突变可在果蝇翅膀的 边缘造成缺口而得名。大量的研究表明，Notch信号途径在细胞增殖、分化和凋亡 中起着重要的作用。当发现急性T淋巴细胞白血病发生与Notch受体有关时，Notch 与肿瘤的关系受到关注。当配体与受体结合后，Notch受体经酶切水解释放其胞内 子CSL结合，进而调控下游基因的表达。 前期研究得出了不同结果：Notchl在肿瘤中可能是癌基因，也可能是抑癌基 因。这种结果的不一致可能与细胞的种类特性有关。本实验证明了Notchl在胃癌 发生发展中起着抑癌基因的作用。Notchl可以显著地抑制胃腺癌BGC823细胞的体 D1的表达有直接的关 内外增殖作用。这种抑制作用与Notchl上调P21和下调Cyclin 使BGC823细胞凋亡。 方 法 l、 免疫组织化学方法染色 采用EnⅥsion方法对胃癌及胃正常组织进行免疫组织化学染色 2、细胞培养 和湿度。 清的I冲MI 1640培养液，37℃5％C02饱和湿度。 3、MTT法检测细胞增殖能力 增殖能力。 (2)检测活化Notchl对BGC823增殖能力影响。 RT 4、Real—timePCR Real．timeRT AGS中mRNA表达水平 5、Westem blot分析 达水平。 (2)鉴定稳定表达NICD的BGC823．NlCD细胞株。 (3)活化Notchl对凋亡途径和细胞周期相关蛋白表达的影响。 6、流式细胞仪检测Notchl对细胞凋亡的影响 7、流式细胞仪检测Notchl对细胞周期的影响 8、裸鼠成瘤实验检测Notchl对BGC823体外增殖能力的影响 结 果 Notchl在胃癌中表达下调 2 (1)Notchl的表达定位于细胞浆和细胞膜，在胃癌组织和正常胃组织中表达 的表达与肿瘤的大小无关(p0．05)。 (2)Real．timeRT Notch1 RCR和westemblot结果显示 mlⅢA在GES．1和 1 各胃癌细胞系均有表达，与GES．1相比较，Notch 1 胞系Notch 1在 AGS、 l蛋白表达组间差异无 60．0％，差异具有显著性(矿0．01)，三种胃癌细胞系Notch 显著性p0．05)。 2、MTT法检测 p0．05)。 3、活化的Notchl抑制BGC823细胞体内外增殖 MTT和裸鼠成瘤实验结果表明Notchl能抑制胃癌BGC823细胞体内外增殖。 4、活化的Notchl能阻滞细胞周期 D1与Notchl诱导的细胞周期阻滞有关。 示上调的P21和下调的Cyclin 5、 活化