n-3多不饱和肪酯饮食对小鼠肥胖的影响及fat-1转基因小鼠打靶载体的构建.pdfVIP

n．3多不饱和脂肪酸饮食对小鼠肥胖的影响及fat-1转基因小鼠 打靶载体的构建 摘要 脂肪酸是维持人体正常生理功能的必须物质，分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪 酸和多不饱和脂肪酸。n一3多不饱和脂肪酸是一类备受医学届关注的多不饱和脂肪 酸，已证明它的摄入具有抗肿瘤和防治代谢类疾病的作用。 本实验第一部分将健康小鼠分为高饱和脂肪酸饮食组、n-3多不饱和脂肪酸饮 食组和对照组，记录每周小鼠进食量和体重，用ELISA法检测小鼠血清脂联素、增 食因子A、抵抗素水平，来研究n-3多不饱和脂肪酸饮食对小鼠肥胖程度及相关细 胞因子血清水平的影响。结果发现n-3多不饱和脂肪酸饮食组小鼠的肥胖程度明 显低于高饱和脂肪酸饮食组小鼠(PO．05)，增食因子A和抵抗素的血清水平明显 低于高饱和脂肪酸饮食组小鼠(PO．05)，脂联素的血清水平低于高饱和脂肪酸饮 食组小鼠但无统计学差异；n-3多不饱和脂肪酸饮食组小鼠的各项指标和对照组均 无统计学差异。因此认为n一3多不饱和脂肪酸饮食和高饱和脂肪酸饮食相比，在 为提供小鼠必需脂肪酸摄入的同时，更不易诱导肥胖的发生和发展。 虽然摄入n一3多不饱和脂肪酸的生理功效已获得了医学届的认可，但大量获得 高纯度的n-3多不饱和脂肪酸，特别是DHA和EPA的成本依然很高。如果将能表达 n-3多不饱和脂肪酸的基因或编码能将体内其它物质转化为n-3多不饱和脂肪酸的 酶的基因，通过转基因的方法导入到常见的经济动物，如猪、牛、羊体内，使人们 在一日三餐中即可进行n-3多不饱和脂肪酸的补充，将是一种解决大量获得高纯度 的n-3多不饱和脂肪酸较困难现状的有效途径。 在线虫体内发现的fat-1基因，可编码n-6多不饱和脂肪酸脱氢酶，该酶可将 n-6多不饱和脂肪酸转化为n-3多不饱和脂肪酸，从而改变体内多不饱和脂肪酸比 例。由于小鼠繁育较快，利用基因打靶技术获得转基因小鼠相对容易，因此首先获 得fat-1转基因小鼠，对于利用fat一1基因来优化经济动物的性状，从而获得大量 含有n一3多不饱和脂肪酸的肉、蛋、乳制品具有前瞻性意义。 本实验第二部分，我们对fat-1基因进行密码子优化，增强该基因在小鼠体内 的高效表达，把带有启动子和加尾信号的fat一1基因作为一个表达盒整合到通用打 靶载体pSSC一10上，之后在小鼠第11号染色体脂肪酸脱氢酶域家族6下游的DNA 的片段作为同源短臂(SA)和同源长臂(LA)。再分别将同源长短臂克隆入 筛选标记的基于PNS系统的fat一1转基因小鼠敲入型打靶载体。经酶切鉴定和DNA 转染C57BL／6小鼠胚胎干细胞，进而获得fat-I转基因小鼠的合适载体。 硕士研究生郑征(生物化学与分子生物学) 指导教师 葛银林教授 Effectsofn-3PUFAsDieton Miceand Obesity Constructionof Knock-InVectorforfat-1 Mice Transgenic ABSTRACT PartI To determineifn·3PUFAsdietaffectedonmice and objective obesity cellfactors． obesity-related Methods 36 femalemiceweledividedintothree diet healthy groupsnamelyhi曲fat PUFAsdiet and group，n-3 groupcontrol testthe andfoodintake