川西高原自然发牦牛酸奶中乳酸菌遗传多样性及优良菌株筛选.pdfVIP

ⅢIll rl rllrl rlJIIIJI IIIIIIIIFJuP Y1 801503 中文摘要 采用16SrDNA-PCR．RFLP和16-23S 究了分离自川西高原自然发酵牦牛酸奶子中的82株乳酸菌和11株参比菌株的遗 传多样性，并用16SrDNA基因序列分析技术研究了供试菌株与参比菌株的系统 发育关系。在对82株供试菌株的单株发酵乳的口感比对，酸度测定、凝乳时间 的基础上，筛选出6株凝乳质量好，具有良好口感的乳酸菌株，并对其发酵特性 及系统发育关系进行了研究，结果如下： 1．16S rDNA基因扩增产物的酶切分析表明，在用于酶切试验的5种酶中， MspI酶切条带最丰富，所揭示的遗传信息量大，能很好地揭示供试菌株的遗传 多样性。依酶切结果聚类和代表菌株的系统发育关系研究结果，供试菌株在61％ 相似水平上可分为4个类群，类群I、II、Ⅳ为主要类群，类群I和Ⅳ菌株为 似系数聚类，供试菌株可聚类16个群。酶切结果显示，供试菌株共有23种16S rDNA遗传型，其中编号为1，3，7和15的遗传型是主要遗传型，编号为7的遗 传型共40株，占供试菌株的42％。4个16SrDNA主要遗传型(编号1、3、7和 rDNA 15)，在按61％相似水平的聚类中，编号1、3和15的三个主要遗传型16S 菌株是第1类群的主要菌株；编号为7的遗传型菌株全部为第Ⅳ群菌株。按照81％ rDNA序列分析，供试菌 相似水平聚类的分群结果，对各类群代表菌株进行16S 株中可能有植物乳杆菌(Lactobacillus casei pentosus)、干酪乳杆菌群(Lactobacillus fermentum)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus durans)等类群。 faecalis)以及耐久肠球菌(Enterococcus 2．依供试菌株的16SrDNA基因酶切分析聚类的各类群代表菌株的系统发育研究 结果表明，代表菌株与典型菌株的16SrDNA基因序列的相似度基本都在98％以 下，显示出川西高原牦牛乳酸奶子中的乳酸菌类群比较特殊，可能具有新的种类 或种以下的新分类单元。结合16SrDNA基因序列分析和聚类分析，显示分离自 川西高原牦牛酸奶子的乳酸菌有比较丰富的遗传多样性，这将为筛选优良菌株提 供较丰富的材料。 3．16S一--23S rDNA基因的ISR扩增产物的酶切分析表明，供试菌株共有19种ISR 遗传型，在用于酶切试验的5种酶中，Hinfl酶切条带最丰富，能很好地反映出揭 示供试菌株的遗传多样性。如果按60％的相似系数，供试菌株可分为4个类群，如 果按80％的相似系数，供试菌株可分为14个类群。19种ISR遗传群中，第二遗传 群是主要遗传群。依据ISR扩增产物的酶切的聚类结果，与16SrDNA基因扩增产 物的酶切聚类有较大差异，可能与选择的内切酶有关。 4．试验通过单株凝乳感官品评，筛选出六株发酵凝乳时间短，感官品质良好的乳杆 菌。结合16SrDNA系统发育研究结果和6株菌株产酸特性、凝乳冷藏稳定性、产 粘能力和产乙醛能力的研究结果，六株乳杆菌中菌株SAUE．1和SAUE．5可用于进 rDNA序列分析结果表明， 一步筛选酸乳生产的发酵剂菌种。6株筛选菌株的16S SAUE．1可能为植物乳杆菌(Lactobacillus 戊糖乳杆菌(Lactobacillus pent