座壳孢菌海藻糖的纯化及酶学性质研究.pdfVIP

福建农林大学硕士论文 摘要 采用平板透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法从25株虫生真菌筛选出产海 藻糖酶最高的菌株。 采用单因素筛选法来研究碳源、氮源以及维生素等对产酶量的影响，结果表 明可溶性淀粉、蛋白胨、VB2、pH6和金属离子K+为最适合海藻多糖酶发酵培养 单因素。座壳孢最佳产酶培养基为2．5g／L的可溶性淀粉、59／L蛋白胨、 4×104mol／L K+、0．059／LVB2和pH5．5；最佳产酶条件为为接种量15mL、装液量 50mL、菌龄7d和培养时间3d。在液体摇瓶发酵条件下利用优化的培养条件， U／mL。 座壳孢WYTM．2海藻糖酶产酶活力达到29．38 以最优培养基在最优条件下培养座壳孢WYTM．2获得的发酵液为材料，经硫 酸铵沉淀、离子交换和凝胶层析，获得纯化的海藻糖酶；经SDS电泳验 证表明该纯酶蛋白的分子量约为40KDa。 对纯化的海藻糖酶进行酶学特性研究，结果表明，该酶的最适作用温度为 30。C，在40。C条件下稳定性最好；该酶在pH6．pH7范围内有较高的酶活性，在 制了该酶的活性；甲醇、戊醇、丙酮和二氧六环对该酶起激活作用，乙二醇、甲 醛和戊二醛抑制该酶，正丁醇和丙三醇对该酶先扬后抑。M92+对海藻糖酶的抑制 表现为可逆效应，抑制机理是竞争性的，M92+对酶的pH稳定性的影响不明显， 温度高于60*(2后，随着Mg+浓度的增加，酶的热稳定性相对增加。 l关键词：海藻糖酶，分离纯化，酶学性质 福建农林大学硕士论文 Abstract strainswere from Higher screened isolatesof trehalase-producing twenty-five themethodof zonesandtrehalase entomopathogenicfungi，with transparent activity measurementof culturefiltrate． Theeffectsofthe carbon sourceandvitaminson of SOurCe，nitrogen production trehalasewere studied resultsshowedthatsoluble usingsingle-factoranalysis．The and starch，peptone，vitaminB2，pH6 K+promotedenzymeproduce．Optimum mediumfortrehalase wasobtained culture produce byorthogonaloptimization．The mediumconsistedof soluble 10‘4mol／L 2．59／L starch，59rL K+，0．05 peptone，4x g／L vitaminB2and best