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棘孢曲霉JMUb058柚苷酶的结构及其水解柚皮苷的特性研究.pdf
研究
摘 要
3．2．1．21)两种活
柚苷酶具有d．L．鼠李糖苷酶(EC3．2．1．40)和B—D一葡萄糖苷酶(EC
性，在食品及制药领域具有重要的应用价值。目前，柚苷酶结构尚不明确，其水解柚皮苷
的酶学性质尚未阐明。本论文建立测定柚苷酶水解柚皮苷的酶活性方法，分离纯化棘孢曲
霉JMUdb058的柚苷酶，研究其结构及水解柚皮苷的酶学性质。主要结果如下：
(1) 2695高效液
对柚苷酶水解柚皮苷的酶活性的测定方法进行了研究。用Waters
C18，检测波长
相色谱仪检测反应体系中的柚皮苷、普鲁宁和柚皮素，色谱柱为Symmetry
280
5
洗脱程序是0．7min，A／B／C=62／12／26；7—9min，A／B／C=15／35／50；9—1min，A／B／C=15／35／50；
15—17rain，A／B／C=62／12／26；17—20
的柚皮苷、普鲁宁和柚皮素，从而测定柚苷酶、a．L．鼠李糖苷酶与B．D．葡萄糖苷酶的活力。
Fast S300HR
Flow离子层析和SephacylTM
(2)利用硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose
kDa、84kDa、95
基，其分子量分别为69 kDa及100kDa；质谱鉴定发现分子量最小的亚
基为if,．L．鼠李糖苷酶，另外3个亚基是D．D．葡萄糖苷酶。
六条(a／13)链的三明治结构域，Asp280为该酶的亲核位点，Glu509为酸碱催化位点。
oC及50oC，在50。C
均为4，它们在pH3-6内稳定；它们的最适温度分别为50。C、50．60
以下均较为稳定；1mM与10
mM的A矿、Fe2+及Fe3+对三者均有较强的抑制作用。
mM的柠檬酸盐缓冲体系中对柚皮苷进行水解，该柚苷酶
(5)在50。C、pH4．0、50
mM、0．23
及其c【一L一鼠李糖苷酶与3-D．葡萄糖苷酶的‰分别为0．11 mM及0．53mM，Vmax
分别为258．6 S～、3278S_及4104S～，
U／mg，Kat分别为1500
U／mg、565．1U／mg及707．6
S叫xmM～。
S-IxmM～、14146S叫xmM。1及7733
眨。锄，m分别为14034
值一L一鼠李糖苷酶亚基组成的四聚体，明确了其酸碱催化的机理，并发现了if,一L一鼠李糖苷酶
是其水解柚皮苷的限速酶，为深入研究柚苷酶及开发该酶在食品中的应用奠定了基础。
关键词棘孢曲霉，柚苷酶，Ⅱ一L．鼠李糖苷酶，p．D一葡萄糖苷酶，结构，柚皮苷，酶学特性
andCharacter-zationofthe from
Structure Nar-nginase
aculeatusJMUdb058forthe
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