深海枝芽胞杆菌493活性物质ZH11纯化方法研究.pdfVIP

深海枝芽胞杆菌A493活性物质ZHI1纯化方法研究 摘 要 植物病害一直是世界农业发展的主要危害之一，每年因植物病害而引起的农业 损失非常严重。当前，在化学农药滥用、耐药性严重的情况下，寻找新型的无公害、 易降解的生物农药，符合可持续发展农业的需求。研究者们希望从海洋微生物中开 发出可抗植物病原菌的生物活性物质，用以减少或者替代化学农药的使用。 dokdonens括)， 本研究对象为一株命名为A493的独岛枝芽胞杆菌(Virgibacillus 其产生的抗菌物质对水稻白叶枯病原菌．黄单胞菌有显著抑制效果。本研究是在对 A493产活性物质ZHl 1的分离纯化技术的基础上，对分离纯化方法进行探索、并对 其特性比较分析和抗菌机制进行了初步研究。 本研究原有的纯化ZHll的技术路线为：甲醇处理发酵液得粗提物、采用 Cellulose 路线总体纯化效率不高，故对其纯化方法进行了探索。活性炭处理活性物质粗提液， 无纯化效果，故不予添加此方法；引入了强阳离子SP F．E柱色谱对粗提 Sepharose 物进行高通量处理，大大加快了整体纯化进程；由于ZHll相对分子量小，引入分 离范围小于700 G．10凝胶色谱，除去了大量的比ZHll分子量更小 Da的Sephadex 的部分杂质；CM．52柱色谱，整个洗脱过程从原先11h缩短为4h，大大提高纯化 效率且能除去大量有色杂质，此方法予以保留；DEAE．52柱色谱的整个洗脱时间缩 短为原先的2／5，且TLC检测纯化效果好，故此方法保留；TLC分离，由于氯仿／ 甲醇／浓氨水溶剂系统增加了活性物质回收难度，故舍弃第一步TLC方法，保留第 二步TLC且样品被很好的分离为8个组分，其中除了ZHll外，还分离出一个活性 组分。 将活性物质与三种己知的氨基糖苷类抗生素特性进行了比较。研究发现，在对 几种常见菌株抗性和TLC薄层显色方面，两者之间的差异较大。 在对活性物质分离纯化基础上，用纯化后样品对水稻黄单胞菌进行了抗菌机理 对GlmU酶有一定作用。 关键词：水稻黄单胞菌；深海枝芽胞杆菌；抗生素；分离纯化；作用机理 Abstract the loss harmtothe of world，the isthemain development Pl疵diseaSe agricultural ofchemlcal issevere．At thecircumstance causedbv diseaseeach present，in plant year for of biologicalpesticide resistance，looking and drug the、Ⅳorsening pesticide￡Ibuse the andlow-t