温室盆栽春兰可养内生细菌多样性研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 本研究采用分离培养方法并结合 ARDRA 和 16S rDNA 系统发育分析对温室盆栽春 兰可培养内生细菌群落多样性及春兰根中可分泌 IAA 内生细菌多样性进行了初步研究。 通过对消毒剂次氯酸钠溶液的处理强度进行单因子试验确定春兰三种器官表面灭 菌的最佳条件。结果显示：春兰根和假鳞茎的最佳表面灭菌强度为 75%乙醇浸泡3.0 min， 3.0%次氯酸钠溶液浸泡 2.0 min ，再用 75%乙醇浸泡 30 s ；春兰叶的最佳表面灭菌强度 为 75%乙醇浸泡 1.0 min，2.0%次氯酸钠溶液浸泡 2.0 min ，再用 75%乙醇浸泡 30 s 。 采用 R2A、TSA 和 Döberener 无氮培养基分离纯化不同生长状态的春兰根的内生细 5 菌。结果显示：R2A 培养基分离到的内生细菌种群数量最多，为 2.5×10 cfu/g fw ；TSA 5 培养基分离到的次之，为 1.9×10 cfu/g fw ；Döberener 无氮培养基分离到的最少，为 5 0.9×10 cfu/g fw 。对分离菌株进行ARDRA 和 16S rDNA 系统发育分析发现分离得到的 211 株内生细菌分属于 α-变形菌纲（50.9% ）、γ-变形菌纲（34.6% ）、β-变形菌纲（6.7% ）、 厚壁菌门（5.2% ）、放线菌门（1.9%）和拟杆菌门（0.7% ）6 大分类单元的 23 个已知属， 优势菌属为根瘤菌属（48.3% ）和 Dyella （25.8% ）。其中 R2A 培养基分离到 21 个属， TSA 培养基分离到 11 个属，Döberener 无氮培养基分离到 12 个属，数据显示 R2A 培养 基为春兰根内生细菌最佳分离培养基。 采用 R2A 和 TSA 培养基对春兰根、假鳞茎、叶三种器官的内生细菌进行分离培养， 结果显示：假鳞茎中分离到的内生细菌种群数量最高，为 2.80×103 cfu/g fw ；根次之为 3 3 2.08×10 cfu/g fw ；叶最少为0.22×10 cfu/g fw 。三种器官共分离到春兰内生细菌 123 株， 其中分离自根中的 57 株分属于 5 大类群的 14 个属，优势菌属为类芽孢杆菌属（45.79% ）； 分离自假鳞茎中的 55 株分属于 5 大类群的 15 个属，优势菌属为伯克氏菌属（42.67% ） 和鞘氨醇单胞菌属（21.33% ）；分离自叶的 11 株分属于 4 大类群的 7 个属，无明显优势 菌属。结果表明春兰部分内生细菌显示出器官专一性。以上结果说明春兰内生细菌群落 具有丰富的多样性。 采用 Salkowski 比色法对分离自春兰根的256 株内生细菌进行分泌IAA 的功能筛选， 其中 57 株具有分泌 IAA 能力，占筛选菌株总数的 22.3% 。对该 57 株内生细菌进行 ARDRA 和 16S rDNA 系统发育分析，结果显示：其分属于 6 大类群的 18 个已知属和 4 I 摘 要 个潜在新种或新属，其中类芽孢杆菌属既是可分泌 IAA 的内生细菌中的最优势菌属 （29.8% ），又是高产IAA 的主体类群。 据目前所知，Altererythrobacter 、Brachybacterium 、Chitinophaga、Cellulosimicrobium、 Dyella 、Labrys 、Pandoraea 、Porphyrobacter 8 个属首次作为植物内生细菌被分离出来。 另外，包含 59 株菌的 15 个 ARDRA 分型组的代表菌株与 GenBank 数据库中的最相似序 列的相似性低于 97%，其中包括 14 个潜在新种或新属，其占 ARDRA 分型总菌株数的 16.8