棉花ph1基因克隆与功能分析.pdfVIP

棉花ph1 基因的克隆与功能分析 摘 要 棉花是我国的主要经济作物之一，棉花纤维品质的改良长期以来备受人们关 注。棉花也是人们衣被和日用纺织品的主要原料，大多数布料都要经过有机颜料 染色，而其中大部分有机染料都是有毒的。现在医学研究表明，服饰布料由于印 染而残留的有毒化学物质和染料残留物，会引起皮肤过敏、搔痒，甚至通过皮肤 渗透进入血管和内脏，长期累积于体内，损害人们的身体健康。而彩棉服饰则没 有上述危害，相反它质地柔软、透气、吸汗、富有弹性，穿着舒适，有利于保护 人们的身体健康。随着生活水平的提高和对健康日益重视，人们对天然彩色棉的 需求大大增加。目前，天然棉花纤维主色为白色，虽然有棕色和绿色，但色彩较 为单调很难满足人们的日常需求。因此，拓宽彩色棉色谱，对彩色棉产业的发展 具有举足轻重的作用。 目前，在棉花自身调控颜色的基因还没有克隆出来情况下，棉花纤维颜色的 改良大部分依赖于棉花以外的基因资源，因此克隆棉花自身调控颜色的基因显得 尤为重要。本试验以矮牵牛花色的ph1基因 （登陆号AB027455 ）为探针对棉花EST 数据库进行BLAST检索，获得多条与之高度相似的棉花EST序列；将获得的EST序 列进行首尾拼接,获得新的Contig；以获得的Contig反复对棉花EST公共数据库进 行BLAST检索、拼接,尽可能获得全长cDNA ；根据获得的序列设计引物，克隆出 调节棉花纤维pH值的基因，将其命名为ph1基因，并应用生物信息学软件对其蛋 白质的功能进行了预测分析，同时构建植物表达载体，通过农杆菌介导法转化小 拟南芥，对所克隆的棉花ph1新基因进行初步的功能验证。同时将含有色素基因 的pCAMBIA2301-PchsA -F3’5’H –difF载体通过农杆菌介导法成功的转化到了粉 色矮牵牛中，成功获得转基因植株。 本研究通过电子克隆和分子生物学的方法，已经成功克隆获得棉花ph1基因， 其全长1378bp，最大开放阅读框长度为1248bp,编码416个氨基酸；并且构建了植 物表达载体pBI121-ph1 及RNAi载体2300-pUCCRNAi-phsh ，通过农杆菌GV3101浸 染了小拟南芥。同时将含有色素基因的pCAMBIA2301-PchsA -F3’5’H -difF载体 成功转化到矮牵牛中，经PCR检测证明，目的基因已成功导入矮牵牛中，转基因 植株的花色由粉红色变成了蓝紫色。此种方法为棉花纤维色泽的改良提供一种借 鉴。 关键词 ：棉花，电子克隆，ph1基因 II 棉花ph1 基因的克隆与功能分析 Abstract Cotton is a very important part in China economy and peoples life. The people has paid more and more attention to the quality of the cotton fiber improvements. Cotton is the major raw material used for textile industry, most of the organic pigment dyed fabric to go through, many organic dyes are toxic. Medical research now shows that apparel fabrics for dyeing and residues of toxic residues of chemicals and dyes, can cause skin irritation, itching, or even penetrate through the skin into the blood vessels and internal organs, long-term accumulation in the body, damaging peoples health. The color cotton cl