棉花体细胞胚的生及棉花遗传转化研究.pdfVIP

棉花体细胞胚的再生及棉花遗传转化研究 姓名：顾冉冉（生物化学与分子生物学） 指导教师：彭明 研究员 崔百明 副教授 摘 要 目的：新疆是我国最大的棉花种植基地，质量好，产量高，但是目前推广的品种纤维品 质在国际市场上还没有明显的竞争优势，棉纤维品质的改良已经成为棉花育种工作面临 的攻关瓶颈。棉花再生体系建立存在很多困难，对基因型的依赖、体细胞胚发生率低、 畸形苗比例高、周期偏长等原因都制约着转基因育种的发展。探索生物技术育种新方法， 特别是转基因育种新方法对棉纤维的品质改良具有重要的意义。 方法：本实验以新疆主栽品种新陆早 33 为研究对象，针对棉花转基因技术中遇到的体 细胞胚胎发生频率低，再生体系建立过程中畸形胚数量多和农杆菌介导的棉花转化过程 中的影响因素进行研究。以下胚轴为外植体，通过愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织的分 化、胚状体的萌发，各阶段对不同激素的浓度组合进行实验，完成对棉花胚性愈伤的诱 导到体细胞胚胎发生阶段的优化；以棉花的下胚轴为受体，通过农杆菌介导的方法进行 遗传转化，诱导抗性愈伤组织，对所培养的愈伤组织进行基因组的提取和PCR 检测。 结果与结论：研究证明有利于棉花的愈伤组织生长的培养基是MSB 培养基，激素浓度为 KT 0.1 mg/L，2，4-D 0.1 mg/L，诱导率达到100%。挑选淡黄色的愈伤组织在MSB 培养 基，KON3 加倍、高浓度的KT、低浓度IBA 组合，以麦芽糖和葡萄糖为碳源进行试验。 结果表明：质地疏松的颗粒状愈伤组织容易进行分化培养，体细胞胚胎发生率高。选择 低盐培养基，附加活性炭进行子叶胚的成苗，能够减少畸形胚的数量，根的褐化程度降 低，有利于成苗培养。建立高频率的体细胞胚的诱导体系，体细胞胚胎成熟以后进行萌 发培养，成功建立新陆早33 组织培养再生体系。获得转PBiRDG1-2 ，PBiRDG3-4 的抗 性愈伤组织。 关键词：棉花；体细胞胚胎；再生植株；遗传转化 I Abstract Object: Xinjiang is the biggest cotton base in our country , fine quality , high production, So far our Fiber Quality have did not stand the competition successfully on the international market. the cotton fibre quality could be improved becoming cotton breeding faceing attack bottleneck. Studies on Regeneration System existence is difficult, dependence of genotype t , the somatic embryogenesis rate low, the abnormal seedling proportion is high, the cycle is long and so on reasons to restrict the transgene breeding development. The exploration biological technology breeding new method, specially the transgene breeding new method has the vital significance to the cotton fibre quality improvement. Methods: In this dissertation, we mainly focus on the research Xinluzao 33. According to the somatic embryogeny frequency in view of the