溶氧反馈-分批料高密度培养谷氨酰胺合成酶工程菌.pdfVIP

摘要 摘要 谷氨酰胺合成酶存在于各种原核生物和真核生物中，是生物体中最古老也是最广 泛存在的酶。它参与了生物体碳和氮的代谢，是生物体不可缺少的重要酶类。谷氨酰 胺合成酶和谷氨酸合成酶联合作用催化氨的同化，最终转变成L一谷氨酰胺。L一谷氨酰 胺是一种条件性必需氨基酸。L一谷氨酰胺已广泛应用于医疗保健和运动保健等方面， 其市场需求量日渐增长。 目前，酶促合成法生产L一谷氨酰胺需要谷氨酰胺合成酶催化，但是高效率、低成 本、大规模制造稳定性优良的谷氨酰胺合成酶的方法尚未见报道。因此，研究谷氨酰 胺合成酶的生产方法具有重要意义。 重组菌的高密度培养技术能够减少培养体积，缩短生长周期，提高目标产物的浓 度并减少设备投资，为工业化生产降低成本，因此是基因工程技术走向产业化的关键 环节。 本研究就是通过高密度培养技术大量培养工程菌BL2 胺合成酶产量和降低生产成本，以满足酶法合成谷氨酰胺的基础研究及工业生产的需 养工艺，首先以摇瓶培养为基础，对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、 pH值、诱导剂浓度及时间等进行优化，再扩大至BIOTECH-5BG(5L)自动玻璃发酵罐 培养，利用溶氧反馈补料策略进行分批补料，并在培养过程中保持20％-50％的溶解 氧，7．0—7．5的pH，以及1．0 g／L孚L糖诱导12h，成功地进行了工程菌的高密度培养， 最终细菌干重达到48．1g／L，目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的55％，粗提物酶比活 为10．35u／rag，整个补料过程细菌比生长率稳定的控制在O．1hq左右。 关键词：谷氨酰胺合成酶，L一谷氨酰胺，酶促合成法，高密度培养，溶氧反馈 Abstract Abstract Glutamine inkindsof and one Synthetase(GS)，presentingprokaryotes eukaryotes，is oftheoldestandthemost in isthe enzymes ubiquitous organisms．GSimportantenzymes with it becauseof inmetabolismofcarbonand indispensableorganisms takingpart combinedeffectofGlutamine and nitrogen．The Glutamate on Synthetase Synthetase ammoniaassimilationis of the capable conversionofammoniato favoring L—glutamine isaconditionalessentialamino 皿·Gln)．L—Glll acid．DemandofmarketofL．Ginwhich hasbeen usedinthefieldofhealth and health is widely protection