番茄花粉生殖细与精细胞的分离纯化.pdfVIP

0225 Code：1 University Code：S14509 Register Vo石西爿“X‘翼 煳燃 Dissertationforthe ofMaster Degree and of and Isolation generativesperm purification intomato cells Candidate： Lu Yunlong Prof．Dai Supervisor： Shaojun TaiandA．EWei Associate Liqin Supervisor：Prof．Wang Academic for：MasterofScience DegreeApplied Cell Speciality： Biology DateofOralExamination： NortheastUniversity University： Forestry 万方数据 摘要 摘要 花粉(雄配子体)的发育涉及精细的调控机制，我们希望能通过高通量的组学技术 手段，在转录组、甲基组学等水平了解细胞分化前后的基因表达调控特征，以期进一步 了解雄配子体发育过程中，细胞功能分化和细胞命运决定的分子机制。获得大量高纯度 的生殖细胞和精细胞是首要前提，因此我们对大量分离生殖细胞和精细胞的试验进行了 探索。 我们以番茄花粉为实验材料，通过短时间(20分钟)体外萌发培养，使花粉管长度小 于花粉粒直径，再利用渗透压冲击法释放出位于花粉营养细胞细胞质内的生殖细胞，并 结合Pereoll密度梯度离心，对其进行大量分离纯化。又通过长时间(10小时)的体外萌发 培养，使生殖细胞在花粉管中完成分裂形成两个精细胞，再利用酶解法释放出花粉管中 的精细胞并结合Percoll密度梯度离心，完成了精细胞的大量纯化。应用上述方法分离生 7～1×10 殖细胞的产率约为2．8‰5．6％，细胞密度约为0．5×107个／mL，精细胞的产率约为 7～1．5x10 3．7％～5．5％，细胞密度约为