靶向递释系统—pH敏脂质体分析.pdfVIP

靶向递释系统 ——pH敏脂质体的研究 王弘王志清王升启 摘 要 ／反义寡核苷酸(antisense 或RNA结合并阻断基因表达生物效应分子。由于反义寡核苷酸具有多价阴离子不被 细胞有效摄取，而且其天然磷酸二酯键易被细胞内外酶系统降解使药效大大降低，各 种化学修饰虽然能够在一定程度上增加反义寡核苷酸的稳定性但仍无法解决细胞内溶 酶体内的降解的问题。 为克服反义寡核苷酸应用的局限，采用pH一敏脂质体包封反义寡核苷酸，其设计 目的是：制成口H敏脂质体可在一定程度上避免溶酶体降解并增加ASODN摄取量、 提高ASODN的稳定性能、有效地将ASODN转运到胞浆。 pH一敏脂质体是一种具有细胞内靶向和控制药物(如基因、核酸、肽、蛋白质)释放 的功能性脂质体，即为一种新型靶向递释系统。在酸性条件下，即在核内体形成后几 结构改变，促使脂质体膜与核内体／溶酶体膜的融合，将包封的物质导入胞浆及主动靶 向病变组织，避免网状内皮系统的清除。pH一敏脂质体介导可用来把包封物质定向运 载到细胞内发挥作用，减少药物剂量，提高局部药物浓度和疗效，降低对其它组织的 毒性。实验表明：常规脂质体应用受到限制，主要由于： (1)细胞外被降解：(2) 在细胞内被酶系统降解； (3)配体与包封物电性结合不仅稳定性差，而且影响基因治 疗物质与病毒RNA，癌细胞DNA的结合。为此，本项研究考虑以细胞浆为靶点，利用pH 、 一敏脂质体膜与核内体／溶酶体结合，以克服上述不足并保留其导向特性。尸r ／ 本文以反义寡核苷酸为模型药物，研究了pH敏前体脂质体的制备工艺及包封性 范围内，平均粒径为22．7nm；三批pH敏脂质体的平均包封率为68．3％；体外释药方程 pH敏脂质体粒度适宜，可用于反义寡核苷酸的包封。 为寻找pH敏脂质体的最佳处方和制备工艺。采用正交设计法，通过基因转染实 验，以基因转染荧光测定值作为观测指标。f结果表明在基因与脂质体重量比为(1：8) 4 4条件下均值最大。即基因转染荧光测定值 之间差别非常显著均值都较大，但是以pH5 4、组成大豆磷脂与DC．胆固醇摩尔比为(6：4)时采用超声法 最高的脂质体为在pH5 、 制备。广。 本文通过考察pH敏脂质体是否随pH改变而发生膜破裂的情况。将来航鸡红细胞， 以1％个细胞悬液在不同pH值的缓冲液中与pH敏脂质体孵育1．5小时，吸取红细胞 2～60范围 与pH敏脂质体膜融合良好。说明所研制的脂质体具有pH敏性质，在pH4 内膜发生变化。P／ 幡0备的空白pH敏前体脂质体为白色冻干品。pH敏前体脂质体复水后形成的pH 敏脂质体形态圆整，而且外壁复层囊，大小分布均匀，粒径12．3nm一389．9nm范围内， 平均粒径为22．7nm；研制的pH敏前体脂质体对反义寡核苷酸的包封率有稳定的包封 率，研制的pH敏前体脂质体对反义寡核苷酸的包封率大于67％，每种批号测定6次，三 00时，释药半衰期为“．95 释药方程为Q=I．8382-2．5186×10。2T(y=0．9913)，并且在37 小时。结果说明制备的pH敏前体脂质体水合形成的pH敏脂质体粒度适宜，可用于反 义寡核苷酸的包封。尸 初步稳定性实验结果表明：该pH敏前体脂质体对热、光及湿热不稳定，并且随温 度升高和放置时间延长而影响增大，直至前体脂质体被破坏。pH敏前体脂质体应置室 温或低温避光贮存。 f pH敏脂质体的细胞毒性及包封反义寡核苷酸后对反义寡核苷酸抗流感病毒活性的