《12-红冬孢酵母苯丙氨酸解氨酶基因pal在大肠杆菌中的克隆与表达_侯文婷(里面有对引物)》.pdfVIP

第 10 卷第 5 期 生 物 加 工 过 程 Vol． 10 No． 5 2012 年 9 月 Chinese Journal of Bioprocess Engineering Sep． 2012 doi: 10 ． 3969 /j ． issn． 1672 － 3678． 2012 ． 05 ． 012 红冬孢酵母苯 丙氨酸解氨酶基 因 p al 在 大肠杆 菌中的克隆 与表达 ， ， ， ， 侯文婷 张 梁 顾正华 丁重阳 石贵 阳 ( 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 无锡 214 122) : RNA p al ， ， 摘 要 以红冬孢酵母 总 为模板反转录获得其苯 丙氨 酸解氨酶基 因 测序 与 已公布蛋 白序 列进行比对 相 99% 。 T7 pET-28a( +) pET-28a( +) -p al ， - -D- 似度为 并 以含有 强启动子的 为载体构建重组质粒 通过异 丙基硫代 β 半 ( IPTG) ( PAL) 。 ， PAL 乳糖苷 诱导 实现苯 丙氨 酸解氨 酶 在 大肠杆 菌 中的表达 对诱 导条件进行初 步优化后 重组 菌 42. 99 U / g 。 48. 52% ，L- 1. 73 g / L 。 ， 比酶活可达到 转化 实验 中肉桂 酸的转化 率为 苯 丙氨 酸生成量为 结果表明 红 冬孢酵母 p al 基 因通过表达载体 pET-28a( +) 在 E． coli 中获得了 高效表达 。 : ( PAL) ; ; 关键词 苯 丙氨 酸解氨酶 反转录 重组表达 中图分类号: Q786 文献标志码: A 文章编号: 1672 － 3678( 2012) 05 － 0061 － 06 Cloning and expression of phenylalanine ammonia-lyase gene of Rhodosp oridium toruloides in Escherichia coli HOU Wenting ，ZHANG Liang ，GU Zhenghua ，DING Chongyang ，SHI Guiyang ( National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology ，Key Laboratory of Industrial