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炎性疼痛大鼠背根神经节microRNA134 对MOR1 调节作用的研究 中文摘要 炎性疼痛大鼠背根神经节 microRNA134对MOR1调节作用的研究 中文摘要 第一部分 炎性疼痛大鼠背根神经节miRNA134 与MOR1 的探索性研究 目的 作为结合阿片类物质最重要的受体之一，阿片类受体μ1 （μ opioid receptor 1 ， MOR1 ）在痛觉调制和麻醉镇痛过程中参与并起着重要的作用。微小 RNA (microRNA ，miRNA ）是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，特定的miRNA 如 miRNA134 已被证实与神经生理功能及疼痛调节关系密切。生物信息学分析发现 miRNA134 存在与MOR1 基因的3-UTR 段相匹配的区域，是MOR1 基因调节的可能 参与者之一。本研究的目的是探索炎性疼痛大鼠背根神经节内 miRNA134 与 MOR1 表达情况及其潜在的相互关系。 方法 1）选用雄性Wistar 大鼠，制备炎性疼痛模型 （CFA 组），即大鼠右足皮 下注射完全弗氏佐剂 （CFA ）100μl，相同部位注射等量生理盐水作对照组 （NS 组）。 采用压爪-缩腿法和辐射热-缩腿法来分别测定 14 天内的机械痛阈 （Pressure stimulus threshold ）和热痛阈（Thermal stimulus latency ）。2 ）在4 小时，1 天，4 天，7 天， 14 天五个时间点使用实时荧光定量PCR 的方法检测注射侧L3 、L4 、L5 三枚背根神 经节内的miRNA134 和MOR1mRNA 的表达水平。两者表达的相互关系通过线性回 归的方法进行统计学分析。3 ）研究还对注射CFA 后4 小时、4 天、14 天炎性疼痛大 鼠致痛侧L5 背根神经节内 MOR1 的表达水平通过免疫荧光组织化学的方法进行检 测。4 ）CFA 注射4 天后大鼠同一背根神经节内miRNA134 和MOR1 的表达情况也 通过原位杂交结合免疫组织化学的方法进行了检测。 结果 1）行为学结果显示，注射CFA 后大鼠右足机械痛阈和热痛阈在 1 天后明 I 中文摘要 炎性疼痛大鼠背根神经节microRNA134 对MOR1 调节作用的研究 显降低（P ＜0.05 ），分别于3 天和4 天时降至最低（P ＜0.05 ），持续至注射后第14 天（P ＜0.05 ）。CFA 注射后大鼠左足机械痛阈及热痛阈与生理盐水组无差别（P ＞ 0.05 ）。2 ）实时荧光定量PCR 的结果显示：与对照组比较， CFA 大鼠背根神经节 内miRNA134 在 1 天、4 天、7 天时低于对照组（P ＜0.01 ），4 天后降至最低（P ＜ 0.01 ）。而MOR1mRNA 在4 小时，1 天，4 天，7 天，14 天五个时间点均高于对照 2 组（P ＜0.01 ），4 天后升至最高（P ＜0.01）。统计学分析显示两者呈负性相关（R =0.7363, P ＜0.001 ）。3 ）免疫荧光组织化学显示： CFA 大鼠致痛侧L5 背根神经节内MOR1 表达明显升高，特别是在注射CFA 后4 天达到最高。实验结果显示MOR1 主要表达 在背根神经节小直径神经元内。造模后4 小时、4 天、14 天三个时间点上MOR1 阳 性细胞所占比例与对照组相比明显升高（P ＜0.01 ），在4 天时达到最高（P ＜0.05 ）。 荧光浓度结果也显示高于对照组 （P ＜0.01 ）。4 ）原位杂交显示， CFA 造模后大鼠 致痛侧L5 背根神经节内miRNA134 降低，而同一背根神经节内免疫组织化学结果显 示MOR1 表达升高。这种变化主要发生在小直径神经元中。 结论 CFA造模引起大鼠痛行为发生变化，即痛域下降。同时，炎性疼痛大鼠背 根神经节特别是小直径神经元内MOR1及其mRNA表达先升高后降低，而miR