十字花科黑腐病菌avrXccE1的寄主靶标基因的鉴定.pdfVIP

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2015-11-04 发布于安徽
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十字花科黑腐病菌avrXccE1的寄主靶标基因的鉴定.pdf

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十字花科黑腐病菌avrXccEl的寄主靶标基因的鉴定摘要十字花科黑腐病菌(Xanthomonascampestris 是一种能在世界范围内引起十字花科植物产生黑腐病的革兰氏阴性细菌。研究表明，该菌的无毒基因决定了病菌与寄主植物的相互作用结果。目前己／6LXcc8004菌株中预测了9个无毒基因，其中4个已被实验验证。本实验室前期的研究结果表明，含有无毒基因avrXccEl的．娩c8004对中883的致病力很低，但是该基因的突变体对中自83的致病力显著提高，实验证明质不具有核定向信号和DNA结合结构域，具有胞质蛋白的特征。为了鉴定该基因对应的寄主靶标基因，本研究采用蛋白．蛋白相互作用的研究策略，首先通过酵母双杂交(Yeast 侵染cDNA文库中调取候选互作基因，再用免疫共沉淀技术确认真实的互作基因。本研究的主要研究结果：(1)通SMART方法，建立了cDNA文库，文库转化率为2．7l×106／1“g 和毒性等相关实验均达到了酵母双杂的后续实验要求后。用诱饵来筛选构建的中白83 l cDNA进行序列分析，并对NCBIGenBank数据库进行BlastX。初步从白菜甲基酶、磷酸活化酶、几丁质酶； (3)在已有的3’端的基础上，对泛素共轭连接酶11基因(ubiquitin-conjuncatingligase ofcDNA ends)实验获取该基因的5’端序列，从而得到了全长 amplification 序列，全长为447 11相似性达到 bp，进行氨基酸序列比对与拟南芥的UBC 了97％； 11分别 ligase 121上，三亲结合转化到农杆菌LBA4404压渗到烟草进行瞬时表克隆虱JpBI 达。本研究的最终目标是希望从中找到与AvrXccEl的抗蛋白或者作用因子，最终在分子水平上来防治病害从而提高农作物的产量。 cDNA文库酵母双杂交病原菌与植物互作关键词：黑腐病avrXccEl Il IDENTIFICATIoNOFTARGETGENESINHOSTTHAT WITHAVRXCCElGENEIN叉么Ⅳ兀HD彻MS INTERACT cAMPESTRlSYN．CAMPESTRIS ABSTRACT Xanthomonas is an campestrispv．campestris，Xccimportantcrop the andthen couldinfectcruciferors bacterium，which Gram—negtive plants in showthatthe causeblackrotdiseasetheworldwide．Somerelevantstudies withthe avirulenceinthestrainofthe determinestheinteraction