肿瘤坏死因子α在骨关节炎细胞凋亡明胶酶表达的机制与研究.pdf

㈣删J『『『『㈣㈣ Y1 776石岑芗 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………1 AbSlIract………………………………………………………………………………………………………………．2 前 言………………………………………………………………………………………………………………3 0 第一部分TNFa炎症因子与关节软骨、滑膜细胞凋亡的关系及通路研究………．1 材料与方法………………………………………………………………………。1l 结果…………………………………………………………………………………………………………。17 讨论…………………………………………………………………………………………………………．．27 参考文献……………………………………………………………………………32 第二部分软骨细胞在TNFa刺激下形成基质降解的研究…………………………。35 材料与方法………………………………………………………………………。36 结果…………………………………………………………………………………………………………一41 讨论…………………………………………………………………………………………………………．．z17 l 参考文献……………………………………………………………………………5 全文总结………………………………………………………………………………．．54 附录1．英文缩略语表…………………………………………………………………55 附录2．主要试剂配方…………………………………………………………………57 综述 骨关节炎与调亡事件的研究进展…………………………………………。59 博士研究生期间已发表论文和参会论文……………………………………………．．65 个人简历…………………………………………………………………………………66 至i【谢………………………………………………………………………………………………：…………………67 中文摘要 目的分析膝骨关节炎病人的病变软骨细胞调亡的存在，及在TNFd刺激下细胞调 亡及明胶酶(基质金属蛋白酶—-MMP．2，MMP．9)活性的变化，着重探讨决定软 骨细胞凋亡的信号通路，比较同等条件刺激下滑膜细胞与软骨细胞凋亡命运的区 别。 方法从骨关节炎(OA)病人行全膝关节置换术(11认)中切除的软骨及滑膜组织 中，将切削、消化后的软骨及滑膜细胞进行培养，取原代细胞进行后续研究。人重 组耵忭c【单独刺激及和其通路上不同蛋白的抑制因子联合刺激，收集细胞后，行 Annexin V-FTTC及Pl双染后进行流式细胞仪检测凋亡，同时裂解细胞、提取蛋白 行Westem 谱分析以检测MMP．2和MMP．9的活性变化。 结果OA软骨细胞表达激活形式的caspase．3和PARP，提示其具有调亡背景。 LY294002)或NF．KB(1nMCAPE)后，联合TNF伍刺激可增加软骨细胞调亡，调 亡抑制因子c．FLlP表达下调。抑制MEKl／2(10uM R印amycin)，联合TNF0【刺激不能增加软骨细胞调亡。相反地，同样刺激条件下， 即NF．KB抑制剂(1nMCAPE)联合170n咖ln师Q刺激后，滑膜细胞的调亡较对 n师伍可显著性地增加软骨细胞培养上清内 照组及单药刺激组反而减少。170ng／ml 的酶原MMP．9、激活MMP．9、酶原MMP．2和激活MMP．2的表达。抑制NF．KB (1nM CAPE)能显著性抑制TNFQ诱导的酶原MMP．9