OverlapPCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达分析.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (4): 568~572  ·研究论文 · Overlap­PCR克隆秦川牛 基 因及其在大肠杆菌 中的表达 *  1 2 1 1 4 1 3  1 3 1 ， ， ， ， 张 丽  ，张良志  ，张爱玲  ，陈 宏  **，张春雷  ，张 琴  1. 712100 2. （ 西北农林科技大学动物科技学 院， 陕西省农业分子生物学重点实验室， 杨凌 ； 广东海洋大学农学 院， 524025 3. ， 221116 4. ， 550025 湛江 ； 徐州师范大学细胞与分子生物学研究所 徐州 ； 贵州大学生命科学学院 贵阳 ） Overlap­PCR （ 1 ， 获得 1278bp 摘要：通 过 方法克隆了秦川牛 ） 的增食欲素受体 （ ） 基 因编码 区全长 编码 区全长序列(GenBank登录号:DQ874350)， 将其克隆至 pMD­18T 载体上 ， 经测序表明获得 的 cDNA 序列与 GenBank 公布的序 98% H d pET32a + 转化 Bl21(DE3) 列同源性均为 。阳性质粒经 和 双酶切后， 将目的片段定向克隆到 （ ） 表达载体上 ， 玉 芋 （ ， 用 IPTG 。SDS­PAGE ， 秦川牛 感受态大肠杆菌 ）， 经鉴定正确后 诱导目 的蛋白的表达 表明 基 因在大 肠杆菌中没有表达， 进一步生物信息学分析表明 ， 基因 的表达产物为具有 7个跨膜螺旋 的 G蛋白偶联受体， 复杂的蛋 白质结构使得其不能在原核表达系统中获得表达 。 ： PCR 1 关键词 重组 ； 秦川牛； 增食欲素受体 （ ） 基因； 原核表达 中图分类号: S188  文献标识码: A  文章编号: 1006­1304(2008)04­0568­05  Cloningo