纹皮蝇HypoderminsA%2cC基因DNA疫苗构建及其小鼠免疫特性初步及研究.pdfVIP

摘 要 牛皮蝇蛆病是一种危害严重的人畜共患病，每年都给养牛业带来巨大的经济损 失。国内外研究表明纹皮蝇 Hypoderomin A （HA），Hypodermin B （HB）和Hypodermin C （HC）是该病血清学诊断和免疫疫苗的候选抗原。为了避免药物残留和亚单位疫苗 的各种缺陷，本实验以纹皮蝇Ⅰ期幼虫两种免疫相关基因构建了 DNA 疫苗，并在免 疫水平上进行了研究，为牛皮蝇的免疫防治研究奠定了基础。 本研究根据 Genbank 上的 Hypodermins A,C 基因序列设计上下游引物，以本实 验室构建的pETHA、pETHC 为模板PCR 扩增HA 和HC 基因，以上PCR 产物连接到pMD19-T 克隆载体上并进行序列测定。将序列测定正确的目的片段 (HA和 HC)再亚克隆到真核 表达载体 pcDNA3.1(+)中，构建重组表达质粒(pcHA、pcHC)并经过测序确定其正确 性。结果表明，HA 和 HC 基因序列同 GenBank 上公布的序列（登录号：L24914、 AB054066）核苷酸同源性均为 100%，成功构建了 DNA 疫苗 pcHA 和 pcHC。 牛皮蝇幼虫抗原基因原核表达菌 BL21(含 pETHA)、原核表达菌 BL21(含 pETHC) 以最佳诱导时间均为 4h，最佳 IPTG