布比卡因致SH-SY5Y细胞损伤中ROS爆发及作用靶点研究.pdf

jIIIIIIJFJII JlllIJ lllJIflllIJ JIl Illf {Y1997420 及其作用靶点的研究 博士研究生：卢俊 指导教师：徐世元教授 摘 要 近年来，临床上应用局部麻醉药给患者进行神经阻滞和椎管内麻醉以及术 后镇痛的比率逐年增多，但是在工作中发现，部分病人应用局部麻醉药后发生 神经系统并发症。早期的一些研究表明，局部麻醉药对神经组织的毒性与其剂 量、浓度和作用时间成正相关。离体和在体的实验显示，局部麻醉药可剂量依 赖性地造成神经组织肿胀、退变、脱髓鞘、空泡化和染色体溶解等。但局部麻 醉药引起神经毒性的确切机理还未完全阐明。 布比卡因是临床常用的局部麻醉药之一，其引起神经及心血管毒性反应的 报道逐渐增多，并引起高度关注。研究发现，布比卡因通过抑制线粒体呼吸链 复合物I和干扰氧化磷酸化，使ATP生成减少，并可增加线粒体通透性和降低 线粒体膜电位，使细胞凋亡。另有研究发现布比卡因可诱导Schwann细胞内的 活性氧簇(reactive oxygen 与凋亡有关的蛋白酶)，触发细胞凋亡。但布比卡因增加线粒体通透性、降低线 粒体膜电位和触发ROS产生、释放的启动因素是什么?目前尚不清楚。 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMP．activatedkinase，AMPK)是一种 protein 丝／苏氨酸蛋白激酶，由a、p、丫三个亚单位构成，其中Gt亚单位是催化亚单位， p、丫是调节亚单位。它普遍存在于真核细胞中，参与细胞能量代谢的调控。研 究表明，当细胞内ATP减少，AMP／ATP比率增高时，AMPK激酶系统被激活， 中文摘要 抑制合成代谢途径，以减少ATP的消耗，并同时促进分解代谢途径，以增加细 胞内ATP的产生。另有研究证实，AMPK的持续激活可引起细胞内ROS产生 增多并导致细胞凋亡。因此，推测布比卡因可能通过干扰氧化磷酸化和抑制线 粒体呼吸链复合物I，使ATP生成减少，导致AMPK持续激活，并引起细胞内 ROS爆发性增多，从而导致细胞凋亡。 细胞凋亡主要经过两条信号转导途径。其一是死亡受体途径，细胞表面的 死亡受体通过其细胞外结构域与相应的死亡配体结合，将细胞外凋亡信号传入 体途径，氧自由基、钙超载等刺激因素可使线粒体通透性增加，线粒体膜电位 factor,AIF)，进而 下降，释放细胞色素C和凋亡诱导因子(apoptosis-inducing transition 运孔(mitochondrial pore，mPTP)开放有关。mPTP由电 permeability anion channel，VDAC)、腺苷酸运输体 压依赖性阴离子通道(voltagedependent (adeninenueleotide D，Cyp-D)构 成。Cl-可以从开放的VDAC通道进入线粒体内，并能引起线粒体膜损伤和膜电 位下降，导致分布在线粒体膜间的细胞色素C、AIF等促凋亡分子释放。因此， 布比卡因引起细胞内ROS增多后可能通过促使VDAC开放，导致Cl一流入线粒 体内，使线粒体的渗透压增高、基质肿胀、膜电位降低和通透性增大，释放促 凋亡因子，最终使细胞凋亡。