牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β溶血素(hlb)的克隆,表达及溶血活性分析.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(1):324-330 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.01.042 牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株（zfb）β-溶血素(hlb) 的克隆、表达及溶血活性分析 1,2,3 1 1 1 1 1 2 杨 钦 ，王长法 ，杨宏军 ，杨少华 ，高运东 ，仲跻峰 ，彭广能 1 2 3 （山东省农业科学院奶牛研究中心，济南 250100 ； 四川农业大学动物医学院，四川雅安 625014 ； 山东省潍坊市昌乐县畜牧局，山东潍坊 262404 ） 摘要：【目的】实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血 活性。【方法】PCR 扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因，构建原核表达载体 pET32a+/ hlb,并在 大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价，以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP 反应。【结果】测序结果表明，扩增片段含有993 bp的 ORF，可编码含 330个氨基酸的成熟蛋白；SDS分析 重组蛋白表达水平，IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57 kD，表达量占菌体总蛋白的23.9%；溶血效价分析， 金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278 HU·mg-1 3 -1 ，对奶牛红细胞的溶血效价为9×10 HU·mg ；重组蛋白在 血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的 CAMP 反应。【结论】成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素，该 毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞，显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源 金黄色葡萄球菌β-溶血素，为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础。此外，重组蛋白还可用 来特异性诊断、鉴别无乳链球菌，为兽医临床诊断提供新的方法。 关键词：金黄色葡萄球菌;β-溶血素；克隆；表达；溶血活性；CAMP反应 Expression of β-hemolysin Gene of Staphylococcus aureus Strains Shandong (zfb) and Its Hemolytic Activity 1,2,3 1 1 1 1 1 YANG Qin , WANG Chang-fa , YANG Hong-jun , YANG Shao-hua , GAO Yun-dong , ZHONG Ji-feng , 2 PENG Guang-neng 1