小麦snrk2族成员tasrk2c1分子特征及介导植株抵御干旱和盐分逆境功能研究.pdf

摘要 嘲 干旱、盐分等诱发的高渗胁迫，是影响作物生长、发育和产量的重要逆境。 植株对干旱等高渗环境逆境的响应与抵御过程中，受到许多归属于调控和防御等 类别基因的调节。其中，蛋白激酶如钙依赖蛋白激酶CDPK、MAPK级联途径、 SnRK激酶家族成员以及特定蛋白激酶如酪氨酸磷酸酶P，I甲、双特异磷酸酶 DsPTP和丝氨酸／苏氨酸磷酸酶PP2C等在介导植株应答干旱、盐分和低温等高 渗逆境信号转导中发挥着重要作用。本项研究以在小麦中获得的1个SnRK2家 族成员EST为基础，系统研究了该基因(TaSRK2C1)的分子特征和表达特性， 利用遗传转化技术，研究了该基因上、下调表达对植株抵御干旱和盐分胁迫逆境 1、在富集干旱胁迫特异表达基因的小麦根系cDNA差减文库中，获得了1个 GenBank中获得了对应该EST序列且含有完整编码阅读框的可能一致性序列 源，本研究将其命名为TaSRK2C／。 编码的氨基酸数量为342个。编码蛋白的分子量为38．79 kD，等电点(pI)为5．72。 TaSRK2C1中含有蛋白激酶通常具有的活性位点(activesite)、ATP结合位点(ATP site)、底物结合位点(substratesite)和活化环(activation binding binding loop， A-loop)。此外，该蛋白还含有蛋白激酶的特定保守域如蛋白激酶催化域(PKc)、 like 蛋白激酶大家族类似催化域(PKcsuperfamily)和丝氨酸／苏氨酸激酶催化域 (S—TKc)。TaSRK2C1在细胞中的亚细胞定位可能为细胞质，在三维结构上， 行同源蛋白质查找，获得了5个在氨基酸序列水平上与TaSRK2C1高度同源的不 表明，TaSRK2C／与其他植物种属的同源体可能具有相近的起源祖先。 4、在正常生长的小麦根系中，TaSRK2CI的表达水平较低。干旱、盐分和脱 落酸(ABA)处理下小麦根系中该基因的表达水平明显上调；在上述9h处理时 间内，表现为随着处理时间的延长，均呈不断增加趋势。表明TaSRK2C／对干旱 和盐分胁迫的应答可能是通过脱落酸依赖(ABA．dependent)途径完成的。 TaSRK2C／对生长介质中的氮、磷养分含量变化不产生应答。 5、采用DNA重组技术，构建了正、反义方式融合TaSRK2C1的双元表达载体 pCAMBIA3301．TaSRK2C1币tl 因烟草植株。采用特异扩增重组质粒中目标基因TaSRK2C1正义或反义序列上游 CaMV35S启动子区的特异引物组合，对6个正义表达T1株系和8个反义表达T1株 系进行PCR水平鉴定，结果表明目标外源基因片段均整合至烟草的基因组中。 6、干旱和盐分处理3周后，与野生型植株对照(CK)相比，供试正、反义 表达TaSRK2C1的转基因植株在形态学上发生明显变化。正义表达砌姚a的转 基因系Sen2和Sen6长势明显优于对照，表现为植株长势旺盛，植株个体增大； 而反义表达TaSRK2C1的转基因系Ant3f／铂Ant5长势明显劣于对照，表现为植株长 势弱，植株个体小。上述逆境胁迫下，转基因植株的植株干重、植株生理参数如 叶片叶绿素含量、可溶蛋白含量、叶片脯氨酸含量、可溶性糖含量和丙二醛含量 也发生与植株抵御干旱和盐分逆境表型相符的变化。上述结果表明，TaSRK2C1 能明显增强植株对干旱和盐分胁迫逆境的应答和抵御能力。 7、在干旱和盐分逆境胁迫条件下，可能以ABA依赖的方式诱导了TaSRK2C1 特异性增强表达，进而介导小麦植株应答和抵御上述逆境的过程中，发挥着重要 的调控效应。部分植物种属中可能均存在与小麦TaSRK2C1在序列上高度同源、 具有相似的介导干旱、盐分等高渗逆境信号转导的保守通路。有关TaSRK2C1在 转录水平上对干旱和盐分的应答，及其对外源ABA的响应机制，还需要进一步 探讨。此外，有关TaSRK2C1调控的下游逆境应答和防御相关基因及介导植株应 答和抵御干旱等高渗胁迫的分子机理仍需进一步研究。 aestivum 关键词：小麦(TriticumL．)；