小麦与叶锈菌互过程中β-1,3-葡聚糖酶的表达特征分析.pdf

摘要 本试验室长期以来从事小麦抗叶锈菌侵染生理机制的研究工作，前期工作已经证 明，在小麦与叶锈菌(Puccinia aestivum 到了重要作用。本试验以小麦(TriticumL．)品种洛夫林10和叶锈菌生理小种 合，对不同亲和性组合中B．1，3．葡聚糖酶的表达特征进行了系统研究。获得主要结果 如下： 葡聚糖酶的表达特征。结果表明，在不亲和组合中小麦叶片在接菌后4h p．1，3．葡聚糖 酶基因的表达量较接种后oh有明显增加，呈上调表达，一直至接种后120h在叶片 中的表达水平呈持续增加趋势；而在亲和组合中p一1，3．葡聚糖酶基因在接种后4h较0 h表现出轻微上调表达，之后也呈增加趋势，但其表达量要低于不亲和组合，在接种 基因的表达受叶锈菌侵染诱导，其转录水平在亲和组合和不亲和组合之间的表达差异 意味着该基因可能与小麦抗叶锈菌侵染有关。 p．1，3．葡聚糖酶的表达特征。结果表明，接种后4h，p．1，3．葡聚糖酶在不同组合中均开 始表现上调表达，且呈递增趋势，但在不亲和组合中各时间点的表达量均高于亲和组 合，且高表达的时间持续较长，而亲和组合在接种后期出现下降趋势。 3、分析了不同组合中小麦被叶锈菌侵染后不同时间点D．1，3．葡聚糖酶活性的变 化特征。发现酶活性的变化趋势同酶表达量的变化趋势大体相同，初步表明D．1，3．葡 聚糖酶在小麦抗叶锈菌侵染过程中可能发挥重要作用。 4、利用免疫金标记技术在原位水平对叶锈菌侵染小麦诱导产生的B．1，3．葡聚糖 酶的时空表达特征进行了系统研究。试验结果表明：D．1，3．葡聚糖酶主要定位在寄主 的细胞壁以及细胞间隙中，在不亲和组合中的表达高于亲和组合，且主要分布在菌丝 周围，这种趋势在后期更加明显。这一结果暗示着D．1，3．葡聚糖酶可能直接作用于菌 丝细胞壁，对菌丝的生长产生了抑制作用。 综上所述，我们以小麦品种洛夫林10和叶锈菌生理小种260与165分别组成不 亲和和亲和组合，通过半定量PCR、Western Blotting检测、酶活性测定和免疫金标 记技术分别在转录水平、翻译水平、酶活性和原位水平对叶锈菌侵染诱导产生的B．1，3一 葡聚糖酶进行了系统研究，证明13-1，3．葡聚糖酶对诱发小麦对叶锈菌的抗性反应起到 重要作用，为进一步探讨小麦抗叶锈菌侵染的生理机制奠定了基础，对于全面阐释小 麦抗叶锈菌侵染的防卫反应机理具有重要意义。 关键词：小麦；叶锈菌；防卫反应；D-1，3一葡聚糖酶；半定量PCR；Western Blotting 检测；酶活性测定；免疫金标记 Researchonthe of inthe ofwheatand process expressionanalysisp-1，3一glucanases leafrustinteraction Author：Wu hongbo Adviser．Professor WangDongmei Major：Botany Abstract inthe the Our has been researchon laboratory