扬子鳄b淋巴细刺激因子(yabaff)及家猫增殖诱导配体(capril)的克隆、表达及其生物学功能的研究.pdf

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2015-11-06 发布于贵州
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扬子鳄b淋巴细刺激因子(yabaff)及家猫增殖诱导配体(capril)的克隆、表达及其生物学功能的研究

目录目录 1．5．3与恶性肿瘤发生的关系………………………………………………………。11 1．6结语与展望………………………………………………………………………………11 第二章哺乳动物及禽鸟类B淋巴细胞因子及增殖诱导配体的研究进展…………………。13 I L的分子克隆……………………………………………………13 2．1哺乳动物BAFF／AR l 2．2哺乳动物BAFF／ARL的分子结构及组织分布…………………：．．……………………13 I L的生物学功能…………………………………………………。14 2．3家畜类BAFF／APR 第二部分实验部分……………………………………………………………………………。15 第一章扬子鳄B细胞刺激因子(yaBAFF)的克隆、表达及生物学功能研究……………．．16 1．1实验材料………………………………………………………………………………．16 1．1．1实验动物、质粒和宿主菌……………………………………………………16 1．1．2试剂和耗材……………………………………………………………………16 1．1．3实验仪器………………………………………………………………………16 1．2实验方法………………………………………………………………………………16 1．2．1RNA抽提………………………………………………………………………………………………．16 1．2．2简并引物的设计………………………………………………………………17 RT-PCR…………………………………………………………………．．：……………………………．17 1．2．3 1．2．4cDNA末端快速扩增(RACE)…………………………………………………．18 目录 1．2．5全长cDNA的一步分离鉴定……………………………………………………2l 1．2．6 yaBAFF各个组织表达量检测…………………………………………………21 1．2．7重组表达载体的构建…………………………………………………………2l 1．2．7．1引物设计………………………………………………………………．．21 1．2．7．2 PCR反应………………………………………………………………．．22 1．2．7．3 DNA的酶切与连接……………………………………………………．22 1．2．7．4连接产物转化…………………………………………………………23 1．2．7．5阳性克隆鉴定…………………………………………………………23 1．2．7．6 DNA测序………………………………………………………………．23 1．2．8 pSUM0／yasBAFF在大肠杆菌中的表达………………………………………．23 1．2．8．1 i pSUMO／yasBAFF转化至E．COI．Or ceIIs……23 gamiB(DE3)PLysS 1．2．8．2I PTG诱导yasBAFF的表达……………………………………………23 ‘ 1．2．8．3表达产物的纯化………：………………………………………………24 bI 1．2．9对收集产物进行Westernot检测………………………………………．．24 1．2．10 SUMO标签的切割……………………………………………………………．24 1．2．1