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扬子鳄b淋巴细刺激因子(yabaff)及家猫增殖诱导配体(capril)的克隆、表达及其生物学功能的研究
目录
目录
1．5．3与恶性肿瘤发生的关系………………………………………………………。11
1．6结语与展望………………………………………………………………………………11
第二章哺乳动物及禽鸟类B淋巴细胞因子及增殖诱导配体的研究进展…………………。13
I L的分子克隆……………………………………………………13
2．1哺乳动物BAFF／AR
l
2．2哺乳动物BAFF／ARL的分子结构及组织分布…………………：．．……………………13
I L的生物学功能…………………………………………………。14
2．3家畜类BAFF／APR
第二部分实验部分……………………………………………………………………………。15
第一章扬子鳄B细胞刺激因子(yaBAFF)的克隆、表达及生物学功能研究……………．．16
1．1实验材料………………………………………………………………………………．16
1．1．1实验动物、质粒和宿主菌……………………………………………………16
1．1．2试剂和耗材……………………………………………………………………16
1．1．3实验仪器………………………………………………………………………16
1．2实验方法………………………………………………………………………………16
1．2．1RNA抽提………………………………………………………………………………………………．16
1．2．2简并引物的设计………………………………………………………………17
RT-PCR…………………………………………………………………．．：……………………………．17
1．2．3
1．2．4cDNA末端快速扩增(RACE)…………………………………………………．18
目录
1．2．5全长cDNA的一步分离鉴定……………………………………………………2l
1．2．6
yaBAFF各个组织表达量检测…………………………………………………21
1．2．7重组表达载体的构建…………………………………………………………2l
1．2．7．1引物设计………………………………………………………………．．21
1．2．7．2
PCR反应………………………………………………………………．．22
1．2．7．3
DNA的酶切与连接……………………………………………………．22
1．2．7．4连接产物转化…………………………………………………………23
1．2．7．5阳性克隆鉴定…………………………………………………………23
1．2．7．6
DNA测序………………………………………………………………．23
1．2．8
pSUM0／yasBAFF在大肠杆菌中的表达………………………………………．23
1．2．8．1 i
pSUMO／yasBAFF转化至E．COI．Or ceIIs……23
gamiB(DE3)PLysS
1．2．8．2I PTG诱导yasBAFF的表达……………………………………………23
‘ 1．2．8．3表达产物的纯化………：………………………………………………24
bI
1．2．9对收集产物进行Westernot检测………………………………………．．24
1．2．10
SUMO标签的切割……………………………………………………………．24
1．2．1
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