以木质纤维素为料发酵生产丙酮丁醇的过程以及科学机理研究.pdf

捅要 摘要 随着石油资源短缺、石油价格的不断上扬、以及人们对能源、环境问题重视程度 的提高，生物丁醇作为能源产品正在受到越来越广泛重视。本文以玉米芯为原料进行 了丁醇发酵研究。同时分别对玉米芯原料的湿磨预处理工艺、酶水解底物的粒径分布 与木质纤维素酶水解速率的相关性、利用梭菌生产丙酮丁醇时葡萄糖与／或木糖的消耗 速率以及不同碳源对于梭菌相关基因的转录水平的影响、玉米芯水解液发酵产丁醇的 工艺等进行了研究。这些研究成果为发展木质纤维素原料生产丁醇技术提供了理论基 础。 本论文的主要研究结果如下： 1．酶水解底物粒径分布和木质纤维素酶水解速率相关性的研究 利用湿磨法对玉米芯原料进行预处理，并对湿磨预处理次数、磨盘间隙等对预处 理效果的影响进行了比较。通过酶解反应对预处理效果进行验证，葡萄糖与木糖的得 率分别为71．3％和39．1％，还原糖得率较之未经湿磨预处理组提高了2．24倍。分析发 现，物料湿磨预处理前后并不会生成糠醛和5．羟甲基糠醛等对后续发酵有抑制作用的 抑制物，水解液可以直接用于后续发酵过程。另外，通过SEM分析预处理前后样品， 发现湿磨预处理不仅能够使原料粒径大幅度减小，同时能破坏原料的致密结构，使原 料呈现絮状，纤维结构大大暴露，增加了纤维素酶与纤维素链的接触面积。而X射线 衍射试验表明，湿磨预处理方法对于原料纤维素结晶度影响不大。通过粒径分布研究， 90％值能够快速且准确的判定湿磨预处理过程的终点，为湿 发现粒径分布的Frequency 磨预处理方法的工业化应用奠定了基础。 2．湿磨预处理玉米芯原料发酵生产ABE研究 本研究直接利用湿磨预处理玉米芯原料水解液发酵生产ABE，其发酵过程与纯糖 作为碳源的对照组相比较，发现前者的发酵速率没有被抑制，说明在预处理过程中没 有产生抑制微生物生产丙酮丁醇的毒性物质。预处理后的原料无需进行脱毒处理便可 直接用于ABE发酵，大大简化了操作程序并降低了生产成本。 当以30 h发酵，葡萄糖基本耗尽，ABE生产速 g／L葡萄糖为唯一碳源时，经过60 率与得率分别为O．20 g／L木糖组成 g／L·h和0．36g／g还原糖。当以35g／L葡萄糖与25 T 摘要 的混合糖作为碳源时，经过72 h发酵，结束时仍有44％的木糖剩余，ABE生产速率与 得率分别为0．22 g／L·h和O．35 g／g糖。玉米芯水解液发酵过程(SHF)ABE生产速率 与得率分别为0．17 g／L·h和O．34g／g还原糖，与葡萄糖组及混合糖组相似。结果说明 湿磨预处理玉米芯原料可以用于发酵生产ABE。相对于SHF工艺中0．12 g／L·h的ABE 生产速率，SSF中的ABE生产速率较高，为O．15 g／L·h。分析原因，可能是因为SSF 中同步糖化与发酵过程中水解产生的单糖被转化成丙酮丁醇，消除了底物抑制，从而 提高了底物水解效率所致。通过对SHF与SSF两种工艺中物料与能量进行衡算，SSF 工艺中的能量得率为142％，高于SHF工艺的112％。上述结果表明，湿磨法是一种温 和的预处理方法，预处理过程中不会生成对后续发酵有抑制作用的副产物，减化了工 艺的后续脱毒过程并降低了成本，经过其处理的玉米芯可以被用作生产ABE的原料。 3．同步利用混合糖生产丙酮丁醇菌糖代谢特性研究 通过富集、分离获得一株能够同步代谢葡萄糖与木糖产丁醇的菌株，经过形态及 16S rRNA分析，初步鉴定为Clostridium 萄糖或木糖为碳源时的糖初始利用速率分别为0．8g／L·h和1．0g／L·h，两种糖的利用速率 基本相同