亲和层析法分离纯化油茶籽多糖ⅰ及其单糖组分的测定.pdf

舢舢圳㈣咖Ⅷ…砌㈣圳舢 Y2149952 摘要 本文研究了油茶籽多糖I的分离纯化，选取传统的提取方法和亲和层析法进行比 较。其中传统方法采用50℃的浸提温度，l：3的料液比，并采用乙醇沉淀、Sevag法对 I、CPS 进一步纯化得到三种类型的油茶籽多糖(CPS II、CPSⅢ)。油茶籽多糖样品 nm(核酸)和280llrIl(蛋白质)处无明显吸收，但在190 的水溶液在紫外．可见光260 胁到210nlTl之间有多糖特征吸收峰。亲和层析法特异性较高，本文利用该法中磷酸 基团能与金属离子螯合的原理，并根据陶俊等人的研究结果——“油茶籽多糖I具有 磷酸基团”这一特点对其进行特异性较高的亲和层析处理。本文根据亲和层析柱的制 最后得出当琼脂糖凝胶带上Cu2+时凝胶对油茶籽多糖I的特异性吸附能力达到最大。 然后利用不同浓度及pH的磷酸盐缓冲液对层析柱进行洗脱，磷酸盐的浓度分别为1／5 mol／L和1／15 mol／L的磷酸盐缓冲液。相比较之下，传统方法提取效率较 件是pH为6．0、浓度为O．2 高，但纯度不高；而亲和层析法通过对镍琼脂糖凝胶柱的改装使其在油茶籽多糖I的 纯化过程中特异性较高，从而能得到纯度更高的目标物，同时后者在吸附目标多糖的 同时还能达到部分去除蛋白的效果。 I、 通过毛细管电泳的方法得到油茶籽多糖I、II的单糖组分。先通过酸对CPS CPS II进行水解，得到其水解液，然后对其水解液用PMP进行衍生化处理，用pHl0．5 的硼砂．氢氧化钠作为上机缓冲液，在条件为25℃、．15．0kV的时候进行毛细管电泳， 对照标准品的电泳图谱，得出这两种多糖的单糖组分。本文又进一步根据单糖毛细管 电泳图谱峰面积与浓度的关系，作出木糖、半乳糖、鼠李糖的标准曲线，从而得出 CPSI中木糖、半乳糖的摩尔比以及CPSII中木糖、半乳糖、鼠李糖的摩尔比。 对不同组别的高血脂小鼠分别给予相应的油茶籽多糖I腹腔注射，测定小鼠的各 I溶 项血脂指标，以验证其具有一定的降血脂的作用。本文用高、中、低剂量的CPS 液对高血脂小鼠进行腹腔注射，七天后禁食进行静脉采血，测得血脂各项指标表明高 剂量CPSI溶液的确有一定降血脂效果。 关键词：油茶籽多糖亲和层析毛细管电泳降脂 A山stract This studiestheisolationand of(Z配臻曰砌 paper purification 口詹痧鲁，珑46吕，Seed ofthetraditionalmethodsofextl．actjonand 01igosaccharjdeI，theselection a筑nity methodare methodsuse50℃soaks chromatographvcompared．Traditional exacting to ratioofsolidto usethealcohol method temperature．1：3 liquid，and precipitation，Sevag the