黄瓜芽黄突变相基因的初步定位研究.pdf

黄瓜芽黄突变相关基因的初步定位研究 黄瓜芽黄突变相关基因的初步定位研究 姓名：郭红梅（生物化学与分子生物学） 指导教师：高剑峰 摘要 目的：以新泰密刺黄瓜种子根尖作为材料，得到清晰稳定的黄瓜根尖中期染色体C 显带 和G 显带，为更好的区分黄瓜染色体提供准确的依据，进而把与芽黄突变相关的基因初 步定位到染色体上。 方法：(1)采用改良的中期染色体C 显带方法和ASG 法G 显带制作方法，制作黄瓜中期 染色体C 显带和G 显带。 (2)用荧光实时定量PCR 对HemA1 基因片段在芽黄和正常黄瓜叶片中的差异表达进行了 定量分析。 (3)采用荧光原位杂交(FISH)法对HemA1 基因片段进行了染色体定位。 结果:（1）常规压片法和去壁低渗法得到的染色体浓缩程度较大，显示染色体带纹较少， 单倍染色体带纹总数都为 12 条，而利用改良后的方法得到的染色体浓缩程度较小，显 示的染色体条纹数也多，其单倍染色体条纹总数为 30 条，每条染色体都显示了明显的 着丝粒带、中间带和末端带。将用ASG 法得到的清晰、稳定的黄瓜中期G 显带染色体通 过显微观察、照片测量，对染色体进行了配对，并对带纹特征进行了分析。除了第一对 染色体相对臂比大于1.70,属于sm 型，其余六对都属于m 型。单倍染色体具有G 显带条 纹数22 条。 （2）HemA1 基因在黄瓜正常叶片中的相对表达量为 1.00×103 ，在芽黄突变体叶片中的 相对表达量为0.38×103 。HemA1 基因在芽黄突变体的表达下调。 （3）通过荧光原位杂交技术对HemA1 基因进行染色体定位，杂交信号较弱，背景颜色 较深，染色体定位不准确。 结论：（1）染色体显带的多少和带纹特征与染色体的浓缩程度有关，浓缩程度越大，显 示条纹数越少。使用不同的药品对材料进行预处理，会使染色体停留在不同的时期，也 就会使制片中染色体的浓缩程度也不同。另外，染色体的C 显带和G 显带之间并无明显 的界限，因为染色体制片、显带过程中的每一个环节对染色体显带都很关键，每一个环 节的细微变化都会使染色体显示不同的带纹，所以只要处理条件适合，可以得到染色体 C 带和G 带的中间带。 （2）HemA1 基因在正常黄瓜叶片和芽黄突变体叶片中的表达量有明显差异，且表达量下 调，说明HemA1 基因与黄瓜的芽黄突变有很大关系。 I 黄瓜芽黄突变相关基因的初步定位研究 （3）荧光原位杂交过程中的制片的酶解、固定、脱水、探针的长度及标记以及染色等 多个因素会严重影响杂交结果。 关键词：黄瓜 芽黄 hemA1 荧光原位杂交 II 黄瓜芽黄突变相关基因的初步定位研究 Location of the gene related of the virescent mutation on chromosome of cucumber root tip Author: Guo Hongmei Supervisor:professor GaoJianfeng Abstract Aim:Using the root of cucumber as the material, to obtain the chromosome with the clear and stable C-bands and G-bands ,to differentiate the chromosome better , then located the hemA1 gene encoding the glutamyl-tR