重组毕赤酵母产-腺苷蛋氨酸的发酵条件优化及其分离提取.pdf

重组毕赤酵母产孓腺苷蛋氨酸的发酵条件优化 及其分离提取 摘 要 娶腺苷蛋氨酸(SAM)是三一蛋氨酸的活性形式，具有转甲基、转氨丙基、转硫基的作用， 它对治疗肝病、抑郁症、关节炎等疾病具有较好的疗效，且副作用小。国内对SAM的研 究起步较晚，因发酵水平限制、分离纯化成本高及其不稳定性，到目前为止国内仍未能工 业化生产SAM，市场上用于治疗的SAM产品全部依赖于进口。 mL／min，柱温30。C， mol／L甲酸铵(甲酸调pH3．5，O．22肛水膜过滤)：甲醇=97：3，流速：0．6 检测波长：260nm。同时还建立了利用自制甲醇传感器检测发酵液中甲醇浓度的两种方法： 尾气测量法及硅胶管测量法。尾气测量法响应时间短、检测方便；硅胶管测量法以0．1 mL／min氮气为载气，稳定性良好。 其次，在摇瓶发酵的基础上考察了三．蛋氨酸及甲醇浓度对重组毕赤酵母发酵生产SAM 的影响。实验结果表明，工．蛋氨酸浓度及甲醇浓度对重组毕赤酵母发酵生产SAM有显著 的影响。在发酵培养基中添加7．5班L一蛋氨酸，SAM产量最高，达到0．81g／L。利用甲醇 传感器监测发酵过程甲醇浓度，甲醇浓度在10一30 g／L之间，最有利于SAM的生产，其中 在15 h补加1％甲醇的 g,m甲醇浓度下获得的SAM产量最高，达到1．41g／L，相比每隔24 对照组，SAM产量提高了21％。 L发酵 进一步在7L发酵罐上对甘油．甲醇混合流加培养基的流加方式进行了优化。7 罐对甲醇诱导阶段补加不同甘油含量的甘油．甲醇混合流加培养基的研究结果表明，流加不 同甘油含量的甘油．甲醇混合流加培养基对SAM的产量有影响，在发酵过程流加10％(w／v) 甘油．甲醇混合流加培养基，SAM产量最高，达到6．09 g,m。在甲醇诱导的不同时间段，分 别流加不同甘油含量的甘油。甲醇混合流加培养基，SAM产量得到进一步提高，达到9．79 g／L。 最后，对所收获的毕赤酵母菌体破壁，提取胞内SAM并进行了初步的分离提取。以 提液进行初步的分离纯化，以pH3．0磷酸氢二钠．柠檬酸作为吸附过程缓冲液效果较佳， mL／min，0．05 SAM吸附率达99．3％，以1 mol／L的硫酸溶液进行洗脱，流洗2倍柱体积的 硫酸溶液即能将样品洗脱完全。整个分离提取过程SAM的回收率达74．7％。 关键词毕赤酵母，孓腺苷蛋氨酸，发酵，甲醇，￡．蛋氨酸 Fermentation and Optimization PichiaPastoris Recombinant from Separation Abstract inall an metabolicintermediate important living S-adenosyl-L．methionine(SAM)is isutilized sythesis． transmethylatio