黄连素通过ak信号通路抑制胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡.pdf

摘要 胃癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤，不论性别，其发病率均占各种癌症 首位。尽管胃癌的发病率在下降，但每年大约仍然有一百万的新增病例。黄连 素(Berb甜ne)，又称盐酸小檗碱，是一种异喹啉类生物碱，可从黄连、三角叶黄 连或云连等毛莨科黄连的植物根状茎中提取，是我国常用的中药之一。大量研 究表明，黄连素对肝癌、肺癌、大肠癌等多种肿瘤细胞具有抑制作用，但是， 到目前为止对黄连素作用机制的报道还比较少。Al(t是存在于人类染色体中的 s仃ainf如mAKR／J 鼠类胸腺瘤病毒(t．8 mouse，Akt8)致癌基因的同源物，已被定 3 义为癌基因。AI【t在P13K(phosphatidylinositol de—d印endentl(inase．1)，ILK(Integ血．1inkedbnase)的作用下发生2个位点的 磷酸化。激活的他使下游的多种效应分子磷酸化，形成复杂的信号通路，最 终影响肿瘤细胞的生长、凋亡、血管生成、侵袭、转移等多个生物学行为。本 论文以体外培养的人胃癌细胞系BGC823、SGC790l，及裸鼠荷胃癌模型为研 究对象，对黄连素的功效以及调节机制进行了较为深入的探讨。尤其是探讨黄 连素对Akt介导的凋亡通路和增殖通路的影响。 我们首先采用MTT法分别测定两种细胞系经不同浓度黄连素处理24h和 50岬ol／L黄连素处理不同时间后的细胞增殖存活率。结果表明，黄连素对 BGC823和SGC7901细胞具有明显的存活抑制作用，它们的增殖存活率与黄连 素呈剂量．时间依赖关系。为了探讨黄连素是否具有诱导人胃癌细胞发生凋亡的 能力，又经DAPI染色后荧光显微镜观察和A蛐exin、仰I双染经流式细胞仪检 测相结合的方法，观察到黄连素可以有效诱导BGC823和SGC790l细胞发生凋 亡。同时，我们还用westemblot检测了黄连素对凋产蛋白PARP蛋白的表达影 响。结果发现BGC823细胞中PARP被剪切为cleavedPARP，并且cleavedPARP 的蛋白表达量随着黄连素浓度的增加而增强；SGC790l细胞中虽然没有检测到 cleaved PARP，但是总PARP随着黄连素浓度的增加而减弱。另外，我们通过 PI单染经流式细胞仪检测的方法，结果显示黄连素可以使BGC823和SGC790l cvclinBl，cdc2蛋白表达量上调，进一步证明黄连素能诱导细胞阻滞予G2肺期。 进一步，为了阐明黄连素诱导人胃癌细胞凋亡的分子机制，我们采用w|estem h的 Blot的方法结合蛋白激酶B(Akt)及相关抗体，对经不同浓度黄连素处理24 BGC823和SGC790l细胞AktmRNA全蛋白进行分析，结果表明黄连素抑制 以及转染持续活化怂(叫肛心)质粒预处理细胞后进行全蛋白分析，发现黄连 平的下降，细胞线粒体跨膜电位的改变。最后，建立裸鼠移植瘤模型，证实有 效剂量的黄连素可以在裸鼠体内抑制BGC823细胞的增殖生长，并同步观察到 肿瘤组织p．Akt表达水平的下降。 综上所述，本论文的研究结果证实了黄连素具有抑制人胃癌细胞存活增殖 及诱导凋亡发生的能力，并且显示黄连素抑制Akt／BAD一线粒体信号通路诱导人 胃癌细胞凋亡，或抑制Ak讹仃OR／S6信号通路而阻止细胞存活可能是其调节胃 癌细胞凋亡的分子机制之一。通过这些研究，较为详细地阐明了黄连素在体内 外对人胃癌细胞存活增殖的抑制作用与机制，为其作为抗胃癌药物开发奠定理 论基础。 关键词：胃癌；黄连素；魅；凋亡 II Abstract Theincidencerateof canceristhe in gastric highestmalignanttIlmors， of theincidenceofstomachcancerin there regardlessgender．Although