肾母细胞瘤血清非炎症性标记物的筛选、鉴定及其验证.pdf

摘要 肾母细胞瘤血清非炎症性标记物的筛选、鉴定及验证 博士研究生王磊 导 师王家祥 郑州大学第一附属医院d,JL外科 郑州450052 摘 要 1研究背景与研究目的 肾母细胞瘤是小儿最常见的腹膜后恶性实体肿瘤之一，在d,JD腹部恶性实 体肿瘤中的发病率居第一位，特别是在15岁以下d,JL泌尿生殖系肿瘤中占有很 大比例。左右侧发病数几乎相近，但双侧肿瘤发病较少，大约为肾母细胞瘤总 发病率的3．100A，或同时或相继发生。男性患儿和女性患儿的发病几乎无差别， 但很多研究显示男性患儿发病略多于女性。 肾母细胞瘤患儿的早期症状并不明显，并且由于其发病年龄较低，患者多 为d,JL或婴儿，易忽视或无法描述某些体征，导致其患儿就医时间延迟。现有 检查手段只适用于肿瘤具有一定体积时的患者，如：排泄性尿路造影、超声波、 CT及磁共振等；目前用于肾母细胞瘤诊断的相关性标记物(包括血清乳酸脱氢 酶，甲胎蛋白等)由于敏感性和特异性都较差，所以对肾母细胞瘤的诊断作用 或者协助诊断作用都非常有限。以上情况决定了现在医疗手段重点侧重于对较 晚期肾母细胞瘤患者的治疗(包括手术与药物化疗等)。而美国国家肾母细胞瘤 研究协作组(NⅣrS)研究显示：无论采用哪种治疗方法，肾母细胞瘤患者的生 存率都会随着其分期的升高而下降。由此可见，利用现有的实验技术寻找一种 准确、简便易行的肾母细胞瘤早期检测方法以使肾母细胞瘤患儿得到更早的治 疗并获得长期生存率迫在眉睫。 蛋白质组学及其相关技术的发展可以满足寻找准确且简便易行的肾母细胞 摘要 了蛋白质组学这一概念。蛋白质组本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的 特征。任何的疾病在蛋白质的水平上都会产生变化，无论是量的改变还是质的 改变。由此可以建立一种以监测某种疾病特异性蛋白质水平变化而达到早期诊 断这种疾病目的的诊断体系，这也是现在人们对于疾病早期诊断，特别是肿瘤 的早期诊断的一个重要研究方向。而寻找某种疾病与之对应的特异性蛋白质则 成了这个重要研究方向的核心问题。随着蛋白质组学技术的发展，越来越多的 疾病蛋白质标记物被鉴定。在筛选疾病蛋白质标记物和药物靶点中应用蛋白质 组学被认为是最有效的方法之一，由此可见，其相关技术为寻找准确可行的肾 母细胞瘤早期检测与筛查手段提供了可能。依托蛋白质组学中的几项重要技术： 其中包括“表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI．TOF-MS)”、“基 的串联使用；通过对肾母细胞瘤患者的术前血清、术后血清及正常小儿血清中 蛋白质的定性定量分析，筛选并鉴定出肾母细胞瘤患者血清中存在的特异性蛋 白质或含量与正常小儿血清有差异的蛋白质，并通过蛋白质印渍技术或蛋白质 芯片技术对于以上筛选及鉴定的特异性或者差异性蛋白质进行验证，即为肾母 细胞瘤特异性蛋白质标记物，此特异性蛋白质标记物为肾母细胞瘤的早期临床 诊断和进行下一步治疗提供了可能和参考。 但是，由于癌组织或癌旁组织或能产生一些非特异性的炎症因子，使肿瘤 患者血清中的蛋白质在质和量上更接近于某些炎症性疾病患者或良性疾病患 者。在我们的前期工作中被鉴定出的肾母细胞瘤特异性蛋白质很有可能与以上 提到的炎症性疾病或良性疾病存在着一定的相关性。由于炎症及炎症因子对肿 瘤患者血清蛋白质的质和量上的干扰，使已被鉴定为肾母细胞瘤特异性蛋白质 标记物的可信度和应用性大大降低。造成这种情况的根本原因是：免疫系统和 免疫细胞在肿瘤的发生发展过程中起着非常关键的作用。因此，在本次筛选肾 母细胞瘤特异性蛋白质标记物的工作中，我们将排除炎症及炎症因子的干扰作 为其中一项重要的任务。所以本次课题的研究目的在于筛选鉴定及验证出肾母 细胞瘤血清中的非炎症性蛋白质标记物。 Ⅱ 摘要 2材料与方法 2．1实验材料 2．1．1临床病例资料 本课题选取的303例血清样本均来自于郑州大学第一附属医院小儿外科。