凡纳滨对虾造血激素(astakine)的表达及功能的研究.pdf

i 凡纳滨对虾造血激素(astakne)的表达及其功能研究 摘 要 造血激素(astakine，AST)是一种甲壳动物中具有促进造血组织细胞分化和增 殖的细胞因子。有学者研究发现在软尾太平蜊蛄中发现FIFo．ATPsynthaseD亚基 作为造血激素的受体参与了细胞分化，同时在我们前期研究中发现对虾白斑综合 Virus， 征病毒(WhiteSpotSyndrome wssv)选择FlFo—ATPsynthasep亚基 (BP53)作为侵染宿主的靶点之一，即WSSV与造血激素有相同的作用蛋白—— BP53。根据已有的研究结果，我们推测WSSV可能通过BP53感染宿主，并与 造血激素竞争同一受体，进而干扰细胞分化。了解造血激素在WSSV感染中的 作用可以为解析WSSV侵染宿主的分子机制提供理论基础。 本研究共分5个部分：利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆凡纳滨对 虾(Litopenaeus 造血激素蛋白对凡纳滨对虾抗WSSV感染力的影响；RNAi结合实时荧光定量 PCR分析astakine对WSSV复制的影响。 HM594944)，并对该基因进行了生物信息学分析。该基因全长共1486 bp，含 有1个372 KD。 bp的开放阅读框，编码124个氨基酸，估算分子量为13．3 凡纳滨对虾包含一个Prokineticin结构域。氨基酸序列比较表明，凡纳滨对虾 造血激素lvast与斑节对虾和软尾太平蜊蛄相应序列的同源性分别为87％和 56％；与脊椎动物相应序列的同源性低于36％。 检测，显示有与预期相符合的目的蛋白，并利用纯化的蛋白制备了较高效价 的多克隆抗体(1：10000)。 T 的结合，且这种竞争抑制作用与VP37蛋白量有相关性，即增加VP37蛋白量， 一位点，存在竞争结合作用。 4．造血激素蛋白对凡纳滨对虾抗WSSV感染力的影响：我们以凡纳滨对虾为实 验对象注射LVAST蛋白，然后对虾进行攻毒(WSSV)处理，结果显示：注射 LVAST的虾无论从开始死亡的时间还是半数死亡的时间都比阳性对照组延 迟了将近两天。证明体外注射LVAST能够提高对虾对抗WSSV感染的能力， 起到了一定的保护作用。 的量为1，分析显示：阳性对照组在5 d达到最大值；LVAST注射组的vp37 d达到最大值；lvas卜dsRNA注射组 水平(5d内)约为阳性对照组的1／5，在6 在5d达到最大值，vp37水平均高于阳性对照组(2倍)。说明LVAST能够在 一定程度上抑制WSSV的复制，而造血激素基因的缺失能够使WSSV的复制 速度加快。 在相关性。本研究为深入开展LVAST在WSSV感染中的作用机制奠定了理论基 础。 PCR 表达；多克隆抗体；Dynabeads磁珠：RNAi；Real-time Ⅱ The ressressli onand tI onaI I entI ti caI on exp astaki Re vannamei of￡itopenaeus Abstract Astakinewasa that celldifferentiationand of cytokinepromotes