高氧致肺损伤新生鼠Occludin表达及对肺上皮通透性影响.pdf

·中文论著摘要· 高氧致肺损伤新生鼠Occludin表达及其对肺上皮 通透性的影响 目 的 早产儿支气管肺发育不良(bronchopulmon 在1967年首次提出，其发生与吸入高浓度氧、机械通气治疗、感染、动脉导管未 闭、营养、遗传等因素有关。随着围产医学的迅速发展及肺表面活性物质的普遍 应用，使得极低或超低出生体重儿存活率不断提高，也使BPD的发病率有不断增 加的趋势【1—3l。大量研究表明，在导致早产儿BPD的众多因素中，长期吸入高浓 度氧气是最主要原因和最危险因素f4卅。临床上患有BPD的患儿通常因肺功能障 碍需长时间依赖氧气或反复的机械通气治疗，重者多于生后1年内由于进行性呼 吸衰竭，肺动脉高压而死亡，严重影响了早产儿的生活和生存质量。但由于目前 BPD尚无理想的预防及治疗手段，因此探讨高氧致早产儿BPD的发病机制已成为 国内外新生儿领域的热点研究。 尽管高氧致BPD的发生机制尚未清楚，但其病理变化已明确，即早期的肺水 肿、肺组织炎症反应及晚期的肺泡发育障碍、肺间质纤维化。目前有关其发生机 制的研究主要集中在晚期肺纤维化阶段，但肺纤维化一旦形成将是不可逆转的。 因此探讨高氧致BPD早期的发病机制，对该病的预防及治疗尤为重要。目前高氧 致BPD早期发病机制主要涉及如下方面：(1)由于早产儿肺组织抗氧化酶系统的 功能不足，吸入高氧后，产生过多的氧自由基。大量氧自由基不仅能够引起肺泡 上皮细胞和肺血管内皮细胞损伤、凋亡、坏死，同时引起肺泡毛细血管膜通透性 增加，进而导致炎性损伤及肺水肿的形成17J。(2)细胞因子的作用。越来越多的 研究表明高氧致BPD早期，细胞因子起着极为重要的作用。高氧可引起肺细胞持 necrosisfactor，TNF)．G、 续产生多种细胞因子，例如：肿瘤坏死因子(tumor 态下的肺部炎症反应，进而导致肺组织的炎性损伤‘引。然而以往的研究多着重于 肺组织炎症和氧化应激损伤机制，有关肺水肿的发生机制研究较少，并且应用炎 症因子的拮抗剂或抗氧化剂等干预后，高氧致肺损伤的程度并没有减轻，因此本 实验尝试以高氧肺损伤早期肺水肿的形成机制为切入点，试图为早产儿高氧肺损 伤的防治奠定实验基础和提供理论依据。 近年来研究发现，实验诱导的急性肺损伤模型伴有肺上皮屏障功能的紊乱。 基础，它不仅能够控制肺上皮细胞旁钠水转运，同时也能调节肺上皮通透性以及 维持肺上皮细胞的极性‘9,10]。Occludin蛋白是TJ相关蛋白中的特征性蛋白。大量 研究表明，Occludin能够参与调节细胞旁渗透性【11】，其表达缺失导致上皮屏障通 透功能紊乱(脑，肠，睾丸)，与多种疾病的发生、发展密切相关。但高氧致肺 损伤早期肺水肿的形成是否与Occludin表达异常导致肺上皮屏障功能的紊乱有 关，目前尚未见报道。 本实验以高氧致肺损伤新生鼠模型为对象，研究其肺水肿发生阶段Occludin 基因及蛋白的表达变化，以及其对肺上皮屏障通透性的影响，旨在阐明紧密连接 相关蛋白Occludin在高氧肺损伤早期肺水肿形成中的作用。 材料与方法 一、动物模型及分组 (一)研究对象及分组 健康成年Wistar大鼠(中国医科大学附属盛京医院动物部提供)，雌鼠20只， 雄鼠5只，雌雄交配(4：1)，雌鼠孕21．23d自然分娩的新生鼠320只(雌雄不 限)，生后12小时内(0d)依据吸氧浓度Fi02不同随机分为高氧组和空气组。 (二)动物模型的制备 将新生Wister大鼠320只依据吸入氧浓度随机分为高氧组和空气组，每组160 只，雌雄不限。高氧组生后即置于氧箱中，持续输入氧气，FiO立0．95用测氧仪检 27℃，湿度60％-70％(用变色硅胶吸收水蒸汽)。每天定时开箱15min，添加水、 2 饲料及更换垫料，每24h与空气组交换母鼠，以避免因氧中毒而致喂养能力下降。 空气组置于空气环境下Fi02=0．21，具体方法及控制因素同高氧组。 二、标本的采集及处理 每组分别于实验后的1，3，5，7d随机抽取40只，用5％哥拉腹腔注射麻醉后立即打 开胸腹腔。将其中10只剪断肾动脉放血活杀后，分离肺组织，左肺至于4％多