利用酵母菌发酵生产细胞色素C工艺设计—课程设计说明书_____完整版.docVIP

发酵工程课程设计说明书 利用酵母菌发酵生产细胞色素C的工艺设计 学生姓名： 曹志钦 学号： 1104064103 学 院： 专 业： 指导教师： 2013年 12月 目录 1 绪论 1 1.1 引言 1 1.1.1 细胞色素C的作用 1 1.1.2 酵母菌的特性 1 1.2 课程设计的目的 1 1.3 课程设计的任务及要求 2 2 酵母菌生产工艺设计 3 2.1 酵母菌的选取 3 2.1.1 含微生物材料采集 3 2.1.2 标本材料的预处理 3 2.1.3 所需菌种的分离 4 2.1.4 酵母菌菌株纯种的鉴定 4 2.1.5 菌株的诱变处理 4 2.1.6 菌种初筛 5 2.1.7 菌种的复筛 5 2.2 菌种的保藏 5 2.2.1 菌种保藏的意义 6 3 培养基的配制 7 3.1 培养基的营养要求 7 3.1.1 碳源 7 3.1.2 氮源 7 3.1.3 无机盐及微量元素 7 3.1.4 水 7 3.1.5 生长因子、前体、产物促进剂和抑制剂 8 3.2 培养基的种类 8 3.2.1 孢子培养基 8 3.2.2 种子培养基 8 3.2.3 发酵培养基 8 4 灭菌 10 4.1 灭菌的方法 10 4.2 培养基的连续灭菌 10 4.3 空气灭菌 11 5 种子扩大培养 13 5.1 种子制备工艺 13 5.1.1 孢子制备 13 5.1.2 实验室种子阶段 13 5.1.3 生产车间种子制备阶段 13 5.2 种子质量的控制措施 14 6 发酵工艺控制 15 6.1 发酵的分类 15 6.2 发酵条件的影响及控制 15 6.2.1 基质浓度 15 6.2.2 灭菌情况 15 6.2.3 种子的质量 15 6.2.4 温度对发酵过程的影响 16 6.2.5 pH对发酵过程的影响 16 6.2.6 溶氧对发酵过程的影响 17 6.2.7 CO2 对发酵的影响 17 6.2.8 发酵过程泡沫的控制 17 7 发酵计算 18 7.1 发酵罐的结构 18 7.2 细胞色素C发酵通常采用机械搅拌通风发酵罐 18 7.2.1 常用的机械搅拌通风发酵罐几何比例 18 7.2.2 工艺计算 18 7.2.3 物料衡算 19 7.2.4 种子罐的设计 19 8 放罐及染菌防治 21 8.1 发酵终点的判断 21 8.2 发酵染菌的防治与处理 21 9 下游加工 22 9.1 发酵液的过滤和预处理 22 9.2 细胞破碎 22 9.3 细胞色素C的提纯 23 9.4 成品加工与包装 23 10 总结 24 参考文献 25 1 绪论 1.1 引言 细胞色素C是一种以铁卟啉为辅基的呼吸酶，是细胞呼吸激活剂，属于络合蛋白质。由多肽与血色素络合而成。血色素是铁的衍生物，具氧化还原的可逆性，从而导致细胞色素α能在生理氧化反应过程中表现出电子传导，即Fe2+→←Fe3+的效能，以促进细胞的氧化反应，达到兴奋呼吸目的。它在生物氧化过程中，是一个非常重要的电子传递体。亲缘关系越近的生物，其细胞色素C越相似或相同，比如人和黑猩猩。而如果在进化史上相去甚远，则其细胞色素C也相差越远，比如人和酵母菌。 鉴于细胞色素C分子在呼吸电子传递链中不可或缺的地位，其分子结构是相对保守的。但随着生物的进化，其分子组成结构也必将出现变异，只是相对于其他蛋白来说，细胞色素C分子的很多变异可能导致生物体的电子传递出现问题而导致死亡，因此，其分子进化要缓慢而保守。通常外源性细胞色素C不能进入健康细胞，但在缺氧时，细胞膜的通透性增加，细胞色素C便有可能进入细胞及线粒体内，增强细胞氧化，能提高氧的利用。有关细胞凋亡的研究表明，细胞色素C与细胞凋亡有关，从线粒体中泄露出的细胞色素C有诱导细胞凋亡的作用。本次设计内容为利用酵母菌生产细胞色素C。主要通过采用富集培养、结合平板划线、涂布等手段成功的从活性污泥中分离筛选到高产细胞色素C的酵母菌，之后发酵生产细胞色素C，后期采用二氧化碳超声波萃取等方法提取细胞色素C，达到最佳的生产效果，降低成本。 细胞色素C的作用 【用途一】来自三羧酸循环产生的琥珀酸辅酶A，其肽链仅有104个氨基酸，体内大量存在，无需外源补充。细胞色素C是生物氧化的非常重要的电子传递体，在线粒体崤上与其它氧化酶排列成呼吸链，参与细胞呼吸过程。肝细胞炎症时细胞膜通透性较高，细胞色素C可进人细胞内。可治疗肝衰竭